使用液相色谱-三重四极杆质谱法检测 化妆品中的秋水仙碱和秋水仙胺

摘要本应用简报介绍了一种采用液相色谱-三重四极杆质谱联用系统测定化妆品中禁用物质秋水仙碱和秋水仙胺含量的方法。该方法操作简便、灵敏度高；在 0.1–200 µg/L 的浓度范围内表现出良好的线性；在化妆品空白基质中的两种加标浓度下，目标化合物的回收率在 93%–111% 之间，且六次平行测定结果的相对标准偏差在 1.5%–7.3% 之间，表现出良好的准确度和精密度。该方法适用于化妆品中秋水仙碱和秋水仙胺的检测。

前言化妆品作为美容和个人护理产品，直接影响消费者的皮肤健康和整体福祉。近年来，随着消费者对安全、健康的日益关注，越来越多化妆品中开始添加纯植物提取的中草药成分，以实现天然保湿、抗炎等护肤目的。但是，所添加的中草药成分在产生功效的同时，也有可能引入具有毒性的生物碱类化合物，如秋水仙碱及其盐类。如果消费者长期使用含有此类生物碱类化合物的化妆品，会损伤肝、肾和骨髓等器官，引起呕吐、腹泻、腹痛、胃肠等不良反应[1]。为保障消费者的健康和权益，监管机构严禁化妆品中使用秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺。目前，针对化妆品中秋水仙碱和秋水仙胺的检测方法包括高效液相色谱法 (HPLC)、气质联用法 (GC-MS) 等。其中，HPLC 法操作简单，但选择性差、灵敏度有限，不适用于痕量检测；GC-MS 法选择性高，但需要对样品进行衍生，操作复杂，重现性差。相比之下，液相色谱-三重四极杆质谱联用法 (LC-MS/MS) 作为一种高效、灵敏且可靠的分析技术，正逐渐成为化妆品中秋水仙碱和秋水仙胺的检测方法[2]。本文介绍了一种采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱/6470 三重四极杆液质联用系统检测化妆品中秋水仙碱和秋水仙胺的方法。该方法简单、灵敏度高且准确可靠，适用于准确测定化妆品中的痕量秋水仙碱和秋水仙胺。

实验部分试剂和样品实验用甲醇、乙腈、正己烷、甲酸均为色谱纯，购自美国 Fisher公司；乙酸铵溶液购自德国 Merck 公司；实验用水为经 Milli-Q 系统净化的超纯水（电阻率 18.2 MΩ）；秋水仙碱和秋水仙胺标准品购自天津阿尔塔科技公司；实验用化妆品样品购自北京市场。仪器和设备采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱/6470 三重四极杆液质联用系统；以及涡旋混匀器（德国 IKA 公司）、KQ-500B 型超声仪（昆山市超声器有限公司）、TD5A-WS 离心机（湖南湘仪离心机仪器有限公司）和 Milli-Q 超纯水装置（德国 Merck 公司）

样品前处理称取 1.0 g 样品，准确加入 10 mL 用正己烷饱和的甲醇乙腈 (1/1)溶液，涡旋混匀后，超声提取 15 min；然后以 9500 r/min 离心5 min，取上清液 5 mL 于 10 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀；取 5 mL 加入 15 mL 离心管中，加入 5 mL 正己烷，涡旋混合；然后以 9500 r/min 离心 5 min，弃去上层，并将下层清液用过滤膜过滤后待测[3]。

液相色谱条件色谱柱： Agilent Eclipse Plus C18, 2.1 × 100 mm,1.8 µm（部件号 959758-902）柱温： 40 °C进样量： 2 µL流动相： A) 含 0.1% 甲酸和 5 mmol/L 乙酸铵的水溶液；B) 甲醇流速： 0.3 mL/min梯度程序： 时间 (min) B (%) 0 10 5 100 7 100后运行时间：3 min

质谱条件离子模式： ESI，正离子模式干燥气温度： 300 °C干燥气流速： 8 L/min鞘气温度： 350 °C鞘气流速： 11 L/min雾化器压力： 25 psi毛细管电压： 3000 V喷嘴电压： 500 V多反应监测 (MRM) 采集参数：见表 1

质谱与色谱条件的优化秋水仙碱和秋水仙素属于生物碱类化合物，在电喷雾离子源正离子模式下容易产生 [M+H]+ 准分子离子峰。采用浓度为 1 mg/L 的标准溶液，对质谱离子源和多反应监测 (MRM) 离子对条件进行优化。优化后的 MRM 参数如表 1 所列。确定质谱条件后，选取色谱柱 Eclipse Plus C18 和 PoroshellEC-C18，考察以水/甲醇和水/乙腈作为流动相、以甲酸和乙酸铵作为添加剂时的分离效果。综合考虑分离度、峰形和分析效率等因素，最终选取 Eclipse Plus C18 色谱柱和含 0.1% 甲酸和5 mmol/L 乙酸铵的水溶液/甲醇流动相体系。经梯度优化后，所得秋水仙碱和秋水仙胺标样 (10.0 µg/L) 的 MRM 提取色谱图如图 1 所示。从图中可以看出，秋水仙碱和秋水仙胺得到有效分离，峰形良好，且不受基质明显干扰。

线性范围采用外标法进行定量，在 0.005–200 µg/L 的浓度范围内考察方法线性。结果如表 2 所示。从表中可以看出，秋水仙碱和秋水仙胺分别在 0.01–100 µg/L 和 0.01–200 µg/L 的浓度范围内获得了良好的线性响应，线性相关系数 (R2) 高于 0.997，表明该方法具有较宽的线性范围。

方法准确度和精密度取空白乳液化妆品和膏状化妆品，分别以 2 µg/kg 和 20 µg/kg的浓度添加秋水仙碱和秋水仙胺，并且在每个加标水平下重复测定 6 次，对方法准确度和精密度进行评估。结果如表 3 所列。从表中可以看出，在低加标浓度下，目标化合物的回收率在93.2%–110.7% 之间，相对标准偏差在 4.3%–7.3% 之间；在高加标浓度下，目标化合物的回收率在 93.5%–102.1% 之间，相对标准偏差在 1.5%–3.2% 之间，表明该方法具有良好的准确度和精密度

实际样品分析使用所开发的方法对购自北京市场的 6 种不同品牌的化妆品（包括祛痘消炎膏霜类 3 个、清洁护肤乳液类 3 个）进行分析，在所有样品中均未检出秋水仙碱和秋水仙胺。

结论本文介绍了一种采用液相色谱-三重四极杆质谱联用法测定化妆品中秋水仙碱和秋水仙胺的方法。该方法操作简便、灵敏度高、线性范围宽，且具有优异的准确度和精密度，适用于测定不同类型化妆品中的痕量秋水仙碱和秋水仙胺。