分析有机磷农药的实验方法-® LC-MS/MS液质分析系统

API 3200™ 或3200 QTRAP® LC-MS/MS液质分析系统色谱分离流动相的制备：

1M甲酸铵溶液：称取 63g甲酸铵，溶于1L HPLC级的水中。

流动相A：在1L水 (HPLC级) 中加入5mL 1M 甲酸铵溶液。

流动相B：在1L甲醇 (HPLC级) 中加入5mL 1M 甲酸铵溶液。

样品制备（水果与蔬菜基质）

基于Anastassiadies等人提出的方法[1]：

1. 称量10g切碎的样品；

2. 加入100µL 内标溶液(D5-莠去津 1µg/mL)；

3. 加入10mL乙腈，剧烈振摇；

4. 加入4g无水MgSO4和1g的NaCl；

5. 马上涡旋混合，以防止MgSO4共聚物的生成；

6. 振摇30s后，4300r/min离心5min；

7. 取出1mL初提液，转移至含有150mg无水MgSO4的离心管中；

8. 混合，5200r/min 离心1min；

9. 取出500µL上清液，用水将稀释到1mL，得到提取液浓度约为0.5g/mL。

基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3]：

1. 在5g或10g样品中，加入水到10mL；

2. 加20mL甲醇，使用UltraTurrax 组织匀浆机匀浆2min ；

3. 有时需要过滤或离心；

4. 加入NaCl 溶液 (100mL水中含20 g NaCl )，每6mL加入NaCl溶液2mL ；

5. 用5mL样品溶液浸泡ChemElut 柱；

6. 5min后，用16mL二氯甲烷洗脱；

7. 40℃挥发至干；

8. 用甲醇与水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL，水1mL) 重新溶解；

9. 用0.45µm滤膜过滤。

基于Lehotay et al.[4]提出的方法：

1. 使用Molinex 混合器或类似设备匀质水果或蔬菜样品；

2. 加入乙腈，(15.0± 0.05)g匀质的样品加乙腈15mL，超声提取2min后，混旋5min；

3. 加入6g无水MgSO4和1.5g NaCl的混合物，剧烈振摇1min；

4. 3000 r/min 离心5 min；

5. 取5mL上层溶液，加入1.8g无水MgSO4 和 0.3g Bondesil C8吸附剂；

6. 振摇20s；

7. 使用Eppendorf 5301型浓缩仪，或类似设备挥发至干；

8. 用乙腈/水＝1/9的溶液1mL重新溶解样品；

9. 12000r/min高速离心 2min；

10. 上清液转入自动进样器的进样瓶中备用。

样品制备（蜂蜜、果汁、果酒）[5]

1. 预处理：

蜂蜜样品，对无结晶的实验室样品将其搅拌均匀对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60 ℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温分出0.5 kg作为试样，置于样品瓶中，密封，并标明标记。果汁、果酒样品，将取得的全部原始样品倒入洁净的搪瓷混样桶内，充分搅拌棍匀，再将混匀样品分装出两份(每份500mL),密封，作为试样，标明标记。

2. 提取：

称取15 g试样(精确至0.01 g)于250mL具塞三角瓶中，加入30mL水，于40℃振荡水浴上，振荡溶解15min。加入10mL丙酮，然后将瓶中内容物移入50mL分液漏斗中。用40mL二氯甲烷分数次洗涤三角瓶，并将洗液倒入分液漏斗中，小心排气，用力振摇8次，静置分层，将下层有机相通过装有无水硫酸钠的筒形漏斗，收集于200mL鸡心瓶中。再先后加入5mL丙酮和40mL二氯甲烷于分液漏斗中，振摇1min，静置、分层后收集。如此重复提取两次，合并提取液，将提取液于40℃水浴旋转蒸发至约1mL，待净化。

3. 净化：

在Envi-Carb柱中加入约2 cm高无水硫酸钠，将该柱连接在氨基Sep-Pak柱顶部，并将串联柱放入下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用4mL乙睛+甲苯(3+1)预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品提取液转移至净化柱上，再用2mL乙睛+甲苯(3+1)洗涤样液瓶三次，并将洗液移入柱中。在串联柱上加上50mL贮液器，用25mL乙睛 +甲苯(3+1)洗脱农药，合并于鸡心瓶中，并在40℃水浴中旋转浓缩至约0.5mL。对氨基甲酸醋类农药检测，加入5mL甲醇进行溶剂交换两次，后定容1mL,混匀，用于液相色谱—串联质谱测定。对于其他农药检测，加入25mL正己烷进行溶剂交换两次，后使样液体积约为1mL，加入40µL内标溶液，混匀，用于测定

色谱分离条件：

Agilent 1100 系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。

色谱柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50 mm×2 mm，粒径 4µm。

流动相：A相—H2O+5mM 甲酸铵；B相—甲醇+5mM 甲酸铵

MS/MS 检测：

API 3200™ 或3200 QTRAP® LC-MS/MS液质分析系统；TurboIonSpray®离子源，负离子模式，MRM 扫描方式