生物制品的纯度和杂质分析

电荷变异体分析 

电荷异构体分析是生物治疗蛋白质药物的一项监管要求。这些大的异质分子在生产过程中历经多种酶促翻译后修饰，例如糖基化 和 Fc 段赖氨酸切除。此外，在纯化和储存过程中可发生多种化学修饰，例如氧化和脱酰胺。蛋白质电荷的均一性对蛋白药物结 构、稳定性、亲和力和疗效有着非常重要的影响。离子交换电荷异构体分析是一种高分辨率技术，在分析这些异构体时非常有用。 ICH Q6B 等法规中规定使用蛋白质电荷异构体图谱分析法。

基于 Orbitrap Fusion Lumos 平台的简单快速抗体药物天冬氨酸异构化解析 与小分子药物相比，单抗药物更易在生产、运输和储存的过程中，发生各种翻译后修饰的变化，影响药物分子的稳定性，同时影 响蛋白的结构和功能。 由于异构化本身不会引起分子量和电荷的变化，因此大大增加分析的难度。在完整蛋白的水平上，可以使用离子交换和亲和色谱 进行天冬氨酸异构化分析，不过对于低丰度的异构化水平就无法准确确定。本方法使用 Thermofisher 纳升级液相和最新的三合 一超高分辨质谱仪 Orbitrap Fusion Lumos，采用 ETD 碎裂方式，建立了天冬氨酸异构化质谱解析方法，可以广泛的应用到常规 抗体药物肽段的精细解析中。 通过设置脱酰胺化后修饰和查找包含天冬氨酸异构化的特征碎片离子，在该抗体的酶解肽段中，最终准确鉴定到发生天冬氨酸异 构化的肽段有两条，第一条发生天冬氨酸异构化的肽段为 VVSVLTVLHQDWLNGK，其中第 14 位的 N 发生了脱酰胺化，并且在 该过程中，产生了异构化的天冬氨酸；第二条包含异构化位点的肽段为 GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK，其中第 14 和第 19 位 的 N 发生了脱酰胺化，并且在该过程中，第 14 位的天冬酰胺发生了异构化。