三重串联四极杆式下对雌二醇进行高重现性超低浓度检测

实验部分标样和试剂用十二烷分别制备十种浓度不同的衍生雌二醇校准标样，浓度从1.0 到 600 pg/mL（表 1）。每个样品中，氘代雌二醇 (D3) 内标物 (ISTD) 浓度为 100 pg/mL。从血浆萃取出雌二醇时，使用 2 µL进样量，在回收率为 100% 时，从 1.0 mL 基质进行萃取在理论浓度下将得到大约 20 fg 的分析物。因此，十二烷中 1.0 pg/ml 的标样将代表回收率为 10% 的情况（进样 2 fg），而 2.5 pg/mL 则代表回收率为 25%，以此类推。在 82 次连续进样序列中对校准标样进行评价。建立进样序列，首先将 EA 1-10 系列重复运行六次，再将 EA 1-3 系列重复运行四次。在每一系列之后运行空白进样。

仪器使用 Agilent 7890GC/7000 三重串联四极杆气质联用系统进行分析。7890 系列 GC 配置多模式进样口 (MMI)，并配用 15 m ×0.25 mm × 0.25 µm 膜厚的 DB-5MSUI 分析柱。7000 三重串联四极杆 GC/MS 在 MS/MS-NCI（负化学电离）模式下进行操作。仪器条件列于表 2。使用 Agilent 7693 自动液体进样器 (ALS)，用 10 µL 注射器进样

结果与讨论灵敏度与定量在三重串联四极杆 GC/MS 系统上开发的该方法具有优异的灵敏度。本方法的检测限定义为低检出浓度，即信噪比为 10 时检出浓度：1pg/mL（进样 2 fg），如图 1 所示。图 2 给出了对 1 pg/mL 到 600 pg/mL 的雌二醇定量所得到的出众的线性，R2 值趋近于 1。峰面积比的精度峰面积比（分析物峰面积除以内标物峰面积）的精度由标样 EA-1到 EA-5 确定，每次校准至少包括五次重复测定（图 3）。相对标准偏差（RSD）均未超过 15%，表明该方法的重现性良好。表 3分别给出了 10 次重复测定得到的高精度水平的响应比值，使用的是 EA-1 标样，柱上 2 fg。

结论Agilent 7000 三重串联四极杆 GC/MS 能够使雌二醇的检测限降至 1 pg/ml（柱上 2 fg），同时在 1 到 600 pg/mL 范围内实现高重现性的定量。因此该方法非常适于雌二醇的常规分析。