液质联用对食品中的组胺进行快速、简便和可靠的分析

应用简报介绍了一种采用 UHPLC-MS/MS 和多反应监测 (MRM)模式的简单、快速的分析方法。该方法结合了本实验室已验证适合后续 LC/MS 分析的快速酸萃取及过滤步骤，不仅适合于组胺的分析，同时也可应用于酪胺和色胺的分析。质谱的使用则可省掉衍生步骤。实际上，质谱的使用也可增加结果的可靠性，因为氘代内标可跟踪分析的全过程。

实验部分试剂和标准品天然组胺和氘代组胺标准品从 Qmx 实验室 (Thaxted, UK) 获得。天然标准品用乙腈配制成 1000 ppm 的工作溶液。然后用 0.1 MHCl 稀释得到校准曲线所需的浓度梯度。仪器本方法采用 Agilent 1290 Infinity LC 系统联用配有安捷伦喷射流离子聚焦技术的 Agilent 6490 三重四极杆 LC/MS 系统。仪器条件在表 1 中列出。样品前处理将 10 g 食品样品和氘代内标物加入 50 mL 0.1 M HCl 中。涡旋混合并通过 0.2 µm 尼龙滤膜进行过滤。校准溶液的浓度范围为 1 -50 mg/L。以往分析中常见的生物胺的浓度为 5 - 250 mg/kg，因而需将样品稀释 5 倍以满足准确定量要求。若样品浓度更大，则需加大样品的稀释倍数，使得待分析液的最终浓度在校准浓度范围之内。

结果与讨论色谱分离采用 C3 色谱柱可使组胺在色谱柱上有较好的保留，同时又能最小化基质效应并能确保与干扰组分的分离。在较低浓度时，具有相同 MRM 离子对的其它化合物也出现在谱图上。然而，内标可让色谱图上峰的归属毋庸置疑。

硬奶酪样品样品 A 的浓度较校准浓度低，然而该方法的灵敏度*分析的要求，可基于校准拟合得到半定量的结果。在该分析实例中，提取过程是将 10 g 样品溶于 50 mL 0.1 M HCl 中提取，初步估计组胺的天然浓度为 1 mg/kg。样品 B 则是添加了 300 ppm组胺的样品，可确定方法的回收率。第二个实例中的提取则是将10 g 样品溶于 100 mL 0.1 M HCl 中，该实验结果为 289 mg/kg（回收率大于 96%）。

定量及灵敏度从 0.1 M HCl 中组胺的校准曲线可知，组胺在 1 - 50 mg/L 浓度范围内具有很好的线性，R2 值大于 0.999（图 2）。实际上，该范围的下限显著低于欧盟法规要求的水平。因此，该方法非常有潜力对更低浓度水平的样品进行定量分析，如图 1 所示，这对于食品基质中生物胺的初期形成的考察是非常有用的。

其它工作回收率实验通过在鱼组织中添加 100 mg/kg 标准品 (n=10) 进行。组胺的回收率为 99 ± 4.6%。另外两种生物胺的数据没有在此列出，若有需要可向作者索要。

结论目前已开发了一种简单、快速、便于操作的分析技术来进行食品中组胺的检测。它结合了快速经济的提取过程及高灵敏度的LC/MS/MS 分析检测。该检测基于配备安捷伦喷射流技术的6490 三重四极杆 LC/MS 系统。该方法的检测限显著低于欧盟法规限liang值。另外，该方法也很有可能被应用于其它的安捷伦三重四极杆系统。也可以采用相同的离子对，尽管安捷伦对于其它类型的仪器会推荐不同的离子源条件。该方法也可进行其它生物胺的同时测定。在 Campden BRI 实验室，为应对及支持食品检测工作，已经建立了部分生物胺的反应离子对通道及相关条件。