采三重四极杆液质联用系统对乳品中抗生素多残留进行分析

摘要：本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统/6460 三重四极杆液质联用系统建立 了 56 种抗生素（包括磺胺、喹诺酮、四环素、β-内酰胺、大环内酯、林可胺类 等）同时检测的分析方法。牛奶或乳粉经过乙腈沉淀蛋白提取后，经反相固相 萃取柱通过式净化后，采用薄壳型填料反相 C18 色谱柱 — Agilent Poroshell 120 EC-C18 分离，经配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源的安捷伦三重四极杆液质 联用系统在正离子模式下监测。该方法在 0.1–200 ng/mL 浓度范围内线性相关性 良好，相关系数 R2 ≥ 0.990；在 5 ng/mL 添加浓度下，各化合物峰面积稳定性在 0.40%-14.02% 之间；各化合物仪器定量检测限 (LOQ) 可达到 0.02-2.0 ng/g。通过 对方法灵敏度、精密度和线性范围等方法学参数进行考察，得到所建立的方法 能在 18 min 内对乳品中 56 种抗生素类目标化合物完成快速、高灵敏度的检测分 析，*法规监测要求。

前言：乳及乳制品是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种产 品，其已成为人们非常喜爱的日常食品之一。随着全球经济一体化和食品贸易国 际化，乳及乳制品的质量安全已成为世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题。 其中兽药残留问题是影响其安全的最重要的因素之一。兽药是指用于预防、治 疗、保健、诊断动物疾病或者有目的调节动物生产性能的药物及其制品，可以有 效控制动物的疫情，提高动物的存活率，保证养殖业的健康发展。如果使用不当 或者非法使用药物，过量的药物就会残留在动物体内，当人食用了兽药残留超标 的动物性食品后，就会在体内积蓄，产生过敏、畸形、癌症等不良后果，直接危 害人体的健康甚至生命。目前我国乳制品中仍然存在着一些兽药残留超标的问题。 在历年国家质检总局组织开展的乳制品风险监测项目中， 已经展开的兽药残留检测包括氯霉素、青霉素类、磺胺 类、四环素类、激素等。不同抽检批次的样品均有兽残检 出。根据中华人民共和国农业部发布的第 235 号公告《动 物性食品中兽药最高残留*》，可以用于产奶动物但不得 在乳制品中检出残留的兽药共有 8 种；禁止用于产奶动物 的兽药共有 39 种，其中 29 种兽药禁止用于所有食品动物， 10 种兽药禁止用于产奶动物或特定种类的产奶动物[1-2]。 目前乳及乳制品中兽药残留检测方法及标准多采用液质联 用法，但大都按兽药类别单独检测，开发同时高效检测乳 品中多兽药残留的技术方法可以提高检测效率和通量，也 是兽药残留检测技术的发展方向[3-5]。本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统/6460 三重四极杆液质联用系统建立了 同时快速检测乳及乳制品中 56 种抗生素的确证定量方法， 该方法可以满足对乳品中常见兽药残留的监测。

实验部分 试剂、化学品与消耗品 所有试剂和溶剂均为色谱纯级或者分析纯级。甲醇和乙 腈购自德国默克 (MERCK)。甲酸和乙酸铵购自美国 SigmaAldrich 公司。所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统 现制备的高纯去离子水。 标准品由天津乳品检测中心提供。所有标准品用甲醇配制 为 1 mg/mL 储备液，储存在 -20 °C 冰箱内（有效期 1 年左 右）。用乙腈:水 (50:50) 配制混合工作液 (10 µg/mL)，储存 在 4 °C 下（有效期 1 个月左右）。使用时用乙腈:水 (10:90) 对混合工作液进行适当逐级稀释后使用，现配现用。 实验采用 Agilent Bond Elut Plexa 固相萃取 (SPE) 柱对样品提 取液进行净化。

仪器配置 实验采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统进行分离，其由 下列部件组成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 标准自动进样器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自动进样器冷却器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C) 采用配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源的 Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统，在正离子模式下进行检测。 采用 Agilent MassHunter 工作站软件（B.07 或以上版本）进 行数据采集、确证和定量分析。 样品前处理 称取 1 g 牛奶（精确至 0.1 g）于 15 mL 聚丙烯离心管中，加 入 3 mL 乙腈，涡旋 30 s，以 10000 r/min 离心 10 min，取上 清液于 15 mL 离心管中，再加入 1 mL 乙腈重复提取沉淀蛋 白部分，将两次提取液合并，直接通过 Bond Elut Plexa SPE 柱，在重力作用下收集全部流出液于 15 mL 离心管中，再 取 0.5 mL 乙腈:水（80:20，V/V）洗脱 SPE 柱，收集全部洗 脱液，合并流出液和洗脱液，35 °C 水浴上氮气吹至约 0.6 mL，用水定容至 1 mL，涡旋混匀，过滤膜后上机测定。 称取 0.1 g 奶粉（精确至 0.1 g）于 15 mL 聚丙烯离心管中， 加 1 mL 水混匀，加 4 mL 乙腈涡旋 30 s，以 10000 r/min 离 心 10 min，后面步骤同牛奶处理方法。

结果与讨论 本文采用含有薄壳型填料颗粒的 Poroshell 120 EC-C18 色谱 柱对乳品中 56 种抗生素进行了有效的色谱分离，此填料 (2.7 µm) 和规格 (3.0 x 100 mm) 的色谱柱具有较高的分离柱 效，同时具有较低的色谱压力和较高的柱载量，非常适合 分析乳品基质中多药物残留。流动相中添加 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸铵可以促进正模式下的离子化效率。