猪肉和牛奶中的兽药检测-配备标准 ESI 离子源的 Ultivo

摘要：本应用简报重点介绍了一种 10 分钟的分析方法，用于定量猪肉和牛奶中 12 种 受法规监管的兽药化合物。该方法将 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪与 配备 ESI 离子源的 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统结合使用。根据法规的规定，本方法选择用于评估的 12 种兽药化合物最大残留* (MRL) 高达 1000 µg/kg，需要进行分析的浓度高达 MRL 的 5 倍。Ultivo 的直观设计和易维护性 使该系统非常适合用于上述兽药的高通量检测。选择猪肉糜和牛奶代表脂肪和水含 量较高的多种基质。该方法超出了法规规定的灵敏度要求，该方法中所有兽药 化合物均具表现出高精度 (RSD% < 14%)。

前言：兽药主要用于预防牲畜疾病和寄生虫，促 进生长。畜牧业中兽药使用不当会导致 这些药物在动物组织和其他动物源性食品 （如牛奶或鸡蛋）中积聚。鉴于世界各地 对人食用畜牧产品中存在兽药的关注， AOAC 工作组近期对大量兽药化合物提出 了标准方法性能要求 (SMPR)，其中包括 根据美国[1]、Codex[2]、中国[3] 和加拿大[4] 法规的肉类和牛奶中兽药残留的检测限。 检测限要求规定为 MRL 的一半，始终将 各监管机构中的低MRL 选为默认值。 该方法中包括的 12 种兽药代表一组兽 药，其在牛奶和肉类中的 MRL 相对较 高。每种兽药化合物都有目标检测浓 度，定义为化合物 MRL 的 1/2。12 种 研究化合物的目标检测浓度范围为牛奶 中 22.5–100 µg/kg，肉中 50–500 µg/kg （表 1）。配备标准 ESI 离子源的 Ultivo 三 重四极杆液质联用系统是用于这类测量的 理想系统。

本应用简报展示将 1260 Infinity II Prime 液相色谱系统和配备 ESI 离子源的 Ultivo LC/TQ 联用，对猪肉和牛奶中 12 种受监 管兽药化合物进行定量。Ultivo-ESI 具有与 Ultivo 系统相媲美的出色性能。

实验部分： 试剂与化学品 使用的所有试剂均为 HPLC 或 LC/MS 级。 乙腈和甲醇购自 Honeywell (Morristown, NJ, USA)，超纯水产自配有 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式终端过滤器滤 芯的 Milli-Q Integral 水纯化系统 (EMD Millipore, Billerica, MA, USA)。甲酸购自 Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ, USA)， 氟化铵（固体粉末）购自 Aldrich (SigmaAldrich Corp., St. Louis, MO, USA)，配制 5 mol/L 储备液。兽药标准品购自 SigmaAldrich。

样品前处理 新鲜的 2% 巴氏杀菌有机牛奶和无抗生素 猪肉（80% 瘦肉，20% 肥肉）购自当地 商店。将 2 g 猪肉或牛奶样品在 50 mL 聚 丙烯试管中称重，冷冻待分析。猪肉样 品前处理步骤摘自 Zhao等[5] 之前评估的 方法。本方法进一步对牛奶萃取进行了 改进，总结于图 2 中。使用 Heidolph HeiMIX Multi Reax 系统对样品进行涡旋混 合。使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 过滤 柱，6 mL，600 mg（部件号 5190-1004） 进行猪肉萃取液的最终净化。Captiva EMR-Lipid 过滤柱可高效并选择性去除 脂质，同时具有出色的疏水性分析物回 收率。

仪器 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪 • 1260 Infinity II Prime 全能泵 (G7104C) • 1260 Infinity II Multisampler，配备 冷却装置 (G7167A) • 1260 Infinity II 高容量柱温箱 (G7116A) Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统 • 电喷雾离子源 (G1948B)

方法 表 2 总结了 1260 Infinity II Prime 液相色 谱条件，表 3 总结了 Ultivo 离子源和仪器 参数。表 4 显示了目标化合物的优化 MS 参数。动态多反应监测 (dMRM) 用于数 据收集。MassHunter 定量分析软件 B.09 具有 Quant-My-Way 功能，用于加速和简 化数据分析和审查过程。

实验设计 在萃取流程后对猪肉和牛奶进行加标（后 加标），用于灵敏度、精度和线性研究。 对于回收率评估，将猪肉和牛奶在萃取前 加标至兽药储备液（预加标），并与后加 标猪肉和牛奶萃取物进行比较，以便在分 析后进行回收率 (%) 计算。

结果与讨论:方法灵敏度和精度 所有兽药均可在 1/2 MRL 下准确定量， 大多数兽药可在 1/10 MRL 下进行定量， 后者是本研究中检测的低浓度。图  3 显示了猪肉萃取液中目标检测浓度下所有 分析物的出色信号响应。兽药在低检测 浓度下也表现了出色的精度，所有化合物 的 RSD% 均低于 14%，每种化合物采用低检测浓度，如表 5 所示。低检测 浓度下的准确定量是指六次重复进样中 四次精度达到 80%–120%，且定量离子 和定性离子的信噪比 (S/N) 大于 10。多 种兽药化合物在 1/10 MRL 下具有*的 信号响应，表明定量限远低于 1/10 MRL （图 4 中包括一些示例）。