Q Exactive高分辨质谱检测分析药物中6种亚硝胺类基因毒性杂质

前言：亚硝胺的化学式是NR 2 NO（R代表H或烃基）。大量的动物实验已确认，亚硝胺是强致癌物，并能通过胎盘和乳汁引发后代肿瘤。同时，亚硝胺还有致畸和致突变作用。人群中流行病学调查表明，人类某些癌症，如胃癌、食道癌、肝癌、结肠癌和膀胱癌等可能与亚硝胺有关。

自2018年7月在缬沙坦原料药中检出N-亚硝基二jia胺（NDMA）起，陆续在其它沙坦类原料药中也检出了各类亚硝胺杂质，如N-亚硝基二jia胺（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）等。进一步的调查发现，在个别供应商的非沙坦类的药物中（如雷尼替丁、二甲双胍），亦有亚硝胺类杂质的检出。因此为了保证药品的安全和质量可控，有必要对化学药品中亚硝胺类杂质进行全面的检测和控制。

本文基于Q Exactive超高分辨质谱仪建立了氯沙坦中6种亚硝胺（NDMA, NMBA, NDEA, NEIPA, NDIPA, 和NDBA）分析的高灵敏度检测方法。本方法可实现亚硝胺和氯沙坦主成分的有效分离，定量下限低于目前的限度要求，仪器的灵敏度高、重现性好，*可以满足日常亚硝胺类基因毒性杂质的检测需求。

实验方法

1.仪器与试剂

Thermo Fisher Dionex Ultimate 3000超高效液相色谱仪、ThermoFisher Q Exactive超高分辨质谱仪、Thermo Scientific HypersilGOLD Phenyl色谱柱（P/N：25903-104630）， LCMS级甲醇（Fisher A456-4）、LCMS级水（Fisher W6-4）、LCMS级甲酸（Fisher A117-50）、 Titan3 , 17 mm PVDF过滤器，0.22µm（P/N：42213-PV）。

2.样品前处理

2.1亚硝胺标准品储备液用纯甲醇配置标准品，并用纯甲醇进行稀释，终得到混标中6种亚硝酸的浓度均为100 ng/mL，以此作为标准品储备液。

2.2成品药样品制备

称取适量药片粉末至15mL离心管中，加纯甲醇，涡旋1min，震荡40mins，得到API浓度约为10mg/mL的溶液。提取后，4500rpm离心15mins，取上清液过0.22µm PVDF滤膜，滤液取至进样小瓶中供LCMS分析。

更多了解请点击：液质联用仪