药品中潜在致突变性杂质的痕量水平

摘要：本应用简报重点介绍了一种分析方法，用于精确定量两种潜在致突变性杂质 3-氨基吡啶和异烟酰胺，这两种杂质可由达伐吡啶中的活性药物成分 (API) 4-氨ji吡啶形成。Agilent Ultivo LC/TQ 具有混合模式采集功能，通过该功能可以同时采集样品的定量（SIM 和 MRM）及定性信息（全扫描和产物离子扫描）。混合模式的工作原理是将扫描功能与目标分析物的 SIM 或 MRM 整合到同一时间段内。实验表明该方法具有优异的灵敏度和精度，潜在致突变性杂质的定量限远低于法规要求。

前言：在 API 的生产过程中，具有致突变性的原料或副反应产物可能会存在于生产批次中。这些致突变性杂质可能会被引入到终产品中，因此，必须对生产批次中的潜在致突变性杂质 (PMI) 进行筛查。在本分析方法中，我们分析了达伐吡啶中的 API，即 4-氨ji吡啶产生的 3-氨基吡啶和异烟酰胺。达伐吡啶的标准剂量为 20 mg/天，意味着总 PMI 需要精确检测到低于 75 ppm（毒理学关注的 PMI 阈值 = 1.5 µg/天）[1,2]。本应用简报展示了在高浓度的 API 中，使用具有混合模式采集功能的 Ultivo LC/TQ 分析的两种 PMI ― 3-氨基吡啶和异烟酰胺的定量分析。通常，这种类型的分析需要用到 LC/UV 或单四极杆 LC/MS。然而，使用 LC/TQ 可以更精确地定量分析，因为该系统提高了寻找已知杂质的特异性，且因为降低了化学噪音而具有更高的灵敏度。Ultivo 的混合模式采集功能允许在同一时间段内同时采集 MRM、SIM、产物离子扫描、母离子扫描和中性丢失扫描数据。这种混合模式功能允许用户收集更多信息，并可在一次进样中精确定量目标化合物。根据法规的灵敏度要求，标准 ESI 离子源是本应用经济合理的选择。

这种方法的一个难题是需要从相对高浓度的 API 中检测 PMI 化合物。分离度在此方法中非常重要，因为杂质后洗脱的 API 浓度很高。由于此方法中的分析物具有亲水性，故它们在传统反相色谱柱上的保留性较差。因此，我们采用*的亲水相互作用液相色谱柱（Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱）分离分析物。后，当 API 从色谱柱中洗脱时，液相色谱流路被移出 MS，避免了离子源的潜在污染和质谱检测器的饱和。

实验部分：试剂与化学品本应用简报中使用的所有试剂均为 HPLC 或 LC/MS 级。乙腈购自 Honeywell (Morristown, NJ, USA)。超纯水产自配置 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 终端膜式过滤器 (Merck, Darmstadt, Germany) 的 Milli-Q Integral 水纯化系统。甲酸购自 Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ, USA)，5 mol/L 甲酸铵溶液购自安捷伦科技公司 (Santa Clara, CA, USA)（部件号 G1946-85021）。药物和杂质标准品购自 Millipore-Sigma (Merck, Darmstadt, Germany)。

样品前处理使用 20 mg/mL 的 4-氨ji吡啶溶液作为杂质的基质。用乙腈将 4-氨ji吡啶稀释至 20 mg/mL。用乙腈将 3-氨基吡啶和异烟酰胺溶解并稀释到 10 µg/mL 的储备液浓度。用 20 mg/mL 的 4-氨ji吡啶储备液进行连续稀释，得到 3-氨基吡啶和异烟酰胺的校准曲线。

仪器和实验参数 ：Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱系统 • 1260 Infinity II 全能泵 (G7104C) • 1260 Infinity II 样品瓶进样器，带有集成式柱温箱 (G7129A) • 1260 Infinity II 二极管阵列检测器 HS (G7117C) Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统 • 电喷雾离子源 (G1948B)