三重四级杆液质测定动物源性食品中硝基咪唑类药物

摘要：本应用简报采用 Captiva EMR-Lipid 对鸡肉、猪肉和猪肝样品中的 7 种硝基咪唑类药物进 行萃取净化后，在安捷伦三重四级杆液质上进样分析。前处理过程简单、快速并且分析结 果符合国家标准要求的检测限与定量限，以及可接受的加标回收率。 

前言：硝基咪唑类药物是一类抗生素和抗原虫药，主要用于预防和治疗 家禽组织滴虫病、球虫病以及猪出血性肠炎等疾病，广泛应用于 畜禽和水产养殖业[3]。然而这些化合物被认为可能对人类产生致 癌、致畸、致突变作用，已被美国和欧盟国家禁止使用。我国农 业部将二甲硝基咪唑和甲硝唑列为允许作治疗用、但不得在动物 源性食品中检出的兽药。因此，为进一步加强相关食品安全问题 的监管，开发简单、准确、快速检测动物源性食品中硝基咪唑类 药物及其代谢物的方法显得十分必要。本文建立了一种将 Captiva EMR-Lipid 与三重四级杆液质相结合同时分析 动物源性食品中残留的 7 种硝基咪唑类抗生素的方法。对 7 种硝 基咪唑类药物的净化和回收情况，发现大多数硝基咪唑类药物在 三种前处理方法中均具有很好的保留和洗脱性能；通过盐析的方 法可以更好地去除极性干扰物，提高净化效果，配合 EMR 的方法 也能达到大限度去除脂肪的作用。

实验部分：试剂和样品 甲酸、乙腈均为色谱纯，购于迪马公司；实验用水为经过密理博 纯水仪的二次水。 所用标准品包括甲硝唑 (MNZ)、二甲硝基咪唑 (DMZ)、洛硝哒 唑 (RNZ)、异丙硝唑 (IPZ)、羟基甲硝唑 (MNZOH)、羟甲基甲硝 咪唑 (HMMNI)、羟基异丙硝唑 (IPZOH)，上述标准品纯度均大于 99.0%，购于 Dr 公司。 消耗品：Agilent Bond Elut QuEChERS，部件号 5982-0032； Agilent Captiva EMR-Lipid，600 mg，6 mL，部件号 5190-1004。 样品为市售产品。

仪器和设备：采用 Agilent 1290 Infinity 高效液相色谱系统与 Agilent 6470 串联 质谱系统。

标样前处理：取适量的 MNZ、DMZ、RNZ、IPZ、MHZOH、HMMNI、IPZOH， 分别用甲醇配制成 100 mg/L 的单标储备液。然后取适量的各种 单标储备液，用甲醇溶液配制成 1 mg/L 的混标工作液。

样品前处理：称取样品 5 g，加入 3 mL 水和陶瓷均质子，涡旋混匀后，加入 10 mL 乙腈和 Bond Elut QuEChERS 兽药残留分析萃取盐包（部 件号：5982-0032），涡旋振荡 5 min；在 4 °C 下以 9000 r/min 的 转速低温离心 10 min；移取 4 mL 上清液至另一离心管中，再加 入 1 mL 水，充分混匀后，经过 Captiva EMR-Lipid 600 mg 过滤 柱萃取；收集流出液，在 40 °C 下用氮气吹干，并用流动相定容 至 1 mL；经 Agilent Captiva 0.2 µm RC 滤膜过滤后进行三重四级杆液质 测定。

色谱条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 SB-C18 (3.0 × 100 mm, 2.7 µm) 柱温： 30 °C 进样体积： 5 µL 流动相 A： 水相（含 0.1% 甲酸） 流动相 B： 乙腈（含 0.1% 甲酸） 流速： 0.4 mL/min 梯度程序： 时间 (min) B% 0.00 10.00 1.00 10.00 5.00 50.00 7.00 95.00 9.00 95.00 9.10 10.00 后运行： 3 min

质谱条件 离子源： 采用 AJS ESI，MRM 监测模式 干燥气温度： 250 °C 干燥气流速： 7 L/min 雾化器压力： 40 psi 鞘气温度： 325 °C 鞘气流速： 11 L/min 毛细管电压： 4000 V 喷嘴电压： 0 V 本研究所涉及的各种分析物的质谱参数。

结果与讨论 Captiva EMR-Lipid 的选择 本研究考察了 QuEChERS、QuEChERS EMR 和 Captiva EMR-Lipid 对 7 种硝基咪唑类药物的回收情况，仅有 MNZ-OH 极性较强， 易产生大量极性干扰，导致相应抑制，其它六种硝基咪唑类药物 在三种前处理方法中均具有很好的保留和洗脱性能。终通过 盐析的方法可以更好地去除极性干扰物，提高净化效果，配合 EMR 的方法也达到大限度去除脂肪的作用。因此方法配合使用 QuEChERS 兽药萃取盐包和 Captiva EMR-Lipid 来完成对 7 种硝基 咪唑类药物的分析。

线性范围与检测限：本方法采取基质标准曲线外标法定量。MNZ、DMZ、RNZ、IPZ、 MHZOH、HMMNI、IPZOH 在浓度 0.5–10 ng/mL 范围内线性相 关，且线性相关系数均高于 0.99。 在 S/N > 3 和 S/N > 10 的信噪比下，测得 7 种硝基咪唑类药物在 鸡肉、猪肉和猪肝中的检测限为 0.5 µg/kg，定量限为 1 µg/kg， *可以满足我国标准方法中硝基咪唑药物检测限和定量限的要 求，具体检测限和定量限数据列于表 2 中。

加标回收率与精密度 取空白样品进行加标回收和精密度实验，向空白鸡肉、猪肉和猪 肝中添加 1 μg/kg、2 μg/kg、5 μg/kg 三个浓度水平的混标。在不 同加标浓度下得到的鸡肉基质中的加标回收率在 71.9%–111.0% 之间，猪肉基质中的加标回收率在 79.1%–112.7% 之间，猪肝基 质中的加标回收率在 69.9%–114.7% 之间。鸡肉基质中的加标回收 率相对标准偏差 (RSD) 小于 10.0%，猪肉基质中的加标回收率 RSD 小于 9.8%，猪肝基质中的加标回收率 RSD 小于 10.8%。

结论：本文建立了 Captiva EMR-Lipid 结合液相色谱-串联质谱测定动物源 性食品中 7 中硝基咪唑的残留的分析方法。方法灵敏度满足 和国内标准对于食品中硝基咪唑药物大残留*的要求[1,2]。方 法采用 Captiva EMR-Lipid 大程度去除脂肪，并且中简单易操 作，大大减少了常规 SPE 时间消耗。