三重四极杆液质联用TSQ Quantis 在激素类药物残留检测中的应用

摘要： 本文在 Thermo Scientific™ 全新液相色谱串联质谱三重四极杆平台 Thermo Scientific™ TSQ™ 上针对国标 SN/T 2222-2008 中皮质激素、SN/T 2677-2010 中雄激素以及临 床研究中常检的孕激素和雌激素共计 8 种激素类药物建立了 快速液质检测方法。8 种激素类药物在其相应的浓度范围内 线性关系良好（r2>0.99），LOD 均能满足国标对激 素类药物残留的检测要求。本方法对激素药物的残留检测及 临床检测具有指导意义。

引言 激 素 类 药 物 主 要 包 括 雄 激 素（Androgens）、 雌 激 素（Estrogens）、 孕 激 素（Progestogens）、 糖 皮 质 激 素 （Glucocorticoids）等，因其具有影响动物性别分化，缩短 生长周期，促进毛发生长及恢复皮肤弹性等作用，常被非法 添加于各种动物源食品及化妆品中。研究表明，儿童性早熟、 妇女子宫癌、卵巢癌等疾病发病率的上升均与滥用此类药物 有关，因此 CEC、欧盟、国标、日本等均对动物源食品中激 素类药物残留*作出了严格要求。国标SN/T 2222-2008 及 SN/T 2677-2010 也分别对进出口动物源性食品中糖皮质 激素类兽药残留量及雄性激素类药物残留量检测方法做了相 关规定。

激素作为由内分泌腺或内分泌细胞分泌的内源性生物活性物 质，在体内作为信使传递信息，通过调节各种组织细胞的代 谢活动从而影响人体的生理活动。虽然激素在人体内的含量 很低，但却对人类健康有很大的影响，缺乏或过多都会引发 各种疾病。因此，临床上检测人体多种激素的含量对于疾病 的诊断具有重大意义。本文针对皮质激素、孕激素、雄激素、 雌激素类共 8 种激素类药物建立了快速液相色谱串联质谱检 测方法，既可为激素类药物残留量测定提供技术保障，亦可 为激素的临床检测提供方法借鉴。

2. 实验部分
2.1.  仪器与试剂 Thermo Scientific™ Vanquish™ Binary Horizon 超液相 色谱仪
赛默飞Quantis 三重四极杆质谱仪
甲醇（色谱纯，美国 Thermo Fisher 公司）；实验用水为 Milli-Q 去离子水；NH4OH（色谱纯，SIGMA）
2.2. 化合物信息及溶液配制 2.2.1 8 种激素类化合物及其对应内标物信息（见表 1）
2.2.2 取适量激素类化合物标准品混合储备液，稀释成浓度 在 0.01 ng/mL - 500 ng/mL 范围的标准溶液，进液质联用仪 器分析。
2.3. 色谱条件： 色谱柱：Thermo Scientific™ Accucore™ RP-MS （2.6 µm, 100×2.1 mm）；柱温：40℃；进样量：5 µL；流动相：A 为水（含0.05% NH4OH），B 为甲醇，梯度洗 脱程序（见表 2）

2.4. 质谱条件： 可加热电喷雾电离源（HESI），正、负离子切换扫描模式； 扫描方式：SRM；喷雾电压 (+/-): 3500/2500V；离子传输管 温度：350℃；鞘气压力 30 arb；辅助气压力 10 arb；离子源温度：350℃；碰撞气压力：2 mTorr；选择反应监测离子 对信息见表 3。

表 3. 8 种化合物及质谱采集参数 Table 3 MS/MS parameters of 8 compounds and Internal Standard

3. 实验结果与讨论
3.1 灵敏度测试  采用上述仪器分析方法，8 种激素类化合物及其内标物在 7 分钟内均可获得良好的色谱峰，图1 为 8 种激素类化合物 在 LO处的选择离子流提取图，各化合物灵敏度测试结果 见表 4。

3.2 线性范围测试  采用上述仪器分析方法，对 8 种激素类化合物进行线性范围 测试，线性相关系数 r2 均 ≥ 0.99，线性关系良好。8 种激素 类化合物线性方程及线性相关系数结果见表 4，选取部分化 合物线性方程图见图 2。

3.3. 仪器相对标准偏差 RSD 性能展示 采用上述仪器分析方法，对8 种激素类化合物进行相对标 准偏差测试（n=6）实验结果证明8 种化合物相对标准偏差RSD% 均 ≤ 5% 其中，雄烯二酮50 pg/mL (n=6) RSD% 为 3.39%；100 pg/mL (n=6) RSD% 为 1.04%（图 3）

4. 实验结果与讨论 本文建立了三重四极杆液质联用仪（Quantis）分析8 种激素类药物的检测方法。由实验结果可以看出，基于Quantis 建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围 同时具备优异的重现性，本方法可用于激素类药物的日常分 析检测。