液相色谱柱的分类方法
液相色谱柱的分类方法很多,可以按照键合相类型、用途、基质种类等进行分类。
按照分离规模,我们可以把它分成以下八种:纳流柱、毛细管柱、微径柱、窄径柱、溶剂节省柱、分析柱、半制备柱、制备柱。
目前对于液相色谱分析较常用的是分析柱和窄径柱。
其中分析柱的内径是4.6mm,常用于常规液相,通常情况下它的流量建议在0.5-3ml/min。
窄径柱大多使用在快速液相UPLC或UHPLC中,建议流量是0.1-0.5ml/min。
而纳流柱、毛细管柱、微径柱它们的内径分别是0.1-0.075mm,0.3/0.5mm,1.0mm,它们的灵敏度较高,比较适合在LCMS中使用,其中毛细管柱和纳流柱可以应用在多肽和蛋白质的分析中。
而溶剂节省柱大多是指内径3mm的色谱柱,由于生产工艺等原因它的应用并不是很多,如果您正在使用,较建议使用的流量是0.3-1.5ml/min。
半制备柱和制备柱大多使用在分离较纯的标准品中。其中半制备柱使用在mg级制备分离。制备柱使用在大规模制备数百mg至1g制备。
它们的内径分别是9.4mm和21.2mm,流量建议设为5-10ml/min, 20-60ml/min。
了解了液相色谱柱的分类,大家就可以根据自己的需求进行选择了。
在选择色谱柱之前,也可以先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等。
1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱
2. 如果样品极性太强,或酸性太强;可以选择CN,NH2,或硅胶柱,HILIC(亲水色谱),也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱(缺点是离子对试剂平衡时间长,对流动相pH要求比较精密,否 则很难重复实验,另外离子对试剂很难洗下来,基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验)
3. 若样品是碱性的;可选择高纯硅胶柱(高纯硅胶缺少金属杂质,且硅胶端基封尾)或一些经过修饰的C18柱(如极性嵌入技术或碱去活技术等),他们都会减少碱性化合物的拖尾,一般会选择中性或偏碱的条件下做,因为这样可增加碱性样品的保留
4.如果碱性化合物的极性太强,或碱性太强;可以选择宽pH的C18色谱柱在高pH值检测(优点是方法开发简单,缺点是目前实 现这一技术的色谱柱品牌比较少,价格也高)或者选用HILIC色谱柱(硅胶柱在反相条件下使用,这也是很经典的检测碱性样品的方法)选择强离子交换柱(缺点 是不能用来分析其它样品,对流动相pH要求比较精密,否则很难重复实验)也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱
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