应用三重四极杆串接气质快速筛查烟草中 122 种农药残留

1. 关键词 赛默飞TSQ 8000 Evo；烟草基质；农药残留；快速筛查；方法包

2. 前言 2014 年 1 月 15 日中国烟草总公司颁布了烟草及烟草制品中 多种农药残留量的测定的行业标准 YQ/T 47.1—2014，其中第 一部分为串接气质检测农药残留的方法。该标准于 2014 年 2 月 10 正式实施。赛默飞世尔科技针对这一行业标准，开发了 烟草中检测多农残的方法。 本实验用 TSQ 8000 Evo 结合赛默飞世尔科技农残分析色谱柱 （TR-pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 µm）分析烟草中的 122 种农药残留，得到了非常出色的结果。各种农药的低检测 限在 0.004ppb-0.75ppb 之间，在 5 ppb–200 ppb 的范围有 良好的线性，且用 10 ppb 样品连续 5 针进样，得到 RSD 在 1.01%–9.69% 之间，表明此方法具有良好的重现性。

3. 实验部分 3.1 仪器和色谱柱 TSQ 8000 Evo 三重四极杆气相色谱质谱联用仪（Thermo ScientificTM 美 国），TR-pesticide II 农 残 分 析 柱（30 m*0.25 mm*0.25 µm 带 5m 预柱）

3.2 仪器方法 GC 方法： 传输线温度：300ºC。 PTV 进样口：起始温度为 70ºC，进样时间 0.05 min；然后 以 4.5ºC/min 升至 280ºC，保持 1 min，将所有化合物通过 程序升温的进样方式转移至色谱柱；随后以 14.5ºC/min 升至 320ºC，保持 5 min，设置进样口的清洁模式。不分流进样，不分流时间 1.5 min。 载气：恒流，1.2 mL/min； 柱温箱：40ºC 起始保持 1.5 min，以 25ºC/min 升至 90°， 保持 1.5 min；再以 25ºC/min 的速率升至 180ºC；随后以 5ºC/min 的速率升至 280ºC；后以 10ºC/min 的速率升至 300ºC，保持 5 min。整个升温程序 35 min。 进样量：2 µ

质谱方法： 离子源温度：300 ºC，灯丝电流为 25 µA，采用 T-SRM 方法， 无需分时间段。部分方法如图 1 所示（总共 402 对 SRM 离子 对）：

3.3 前处理方法 提取 称取 2 g 样品于 50 mL 具盖离心管中，至 0.01 g，加 入 10 mL 水（4.1），手持离心管振荡直至样品与水充分混合 后，静置 10 min。分别移取 10 mL 乙腈（4.2）和 0.1 mL 混 合内标工作溶液（4.11.4）于该离心管中，并置于漩涡混合 振荡仪（5.2）上以 2000 r/min 速率振荡 2 min。将离心管在 （-18℃ ~-20℃）条件下冷冻保存 10 min 后，取出。向离心 管中分别加入 5 mL 甲苯（4.3）、4 g 无水硫酸镁（4.4）、1 g 氯化钠（4.5）、1 g 柠檬酸钠（4.6）、0.5 g 柠檬酸氢二钠（4.7）， 立即手持离心管剧烈振荡以防结块，再置于漩涡混合振荡仪 （5.2）上以 2000 r/min 速度振荡 2 min，然后以 4000 r/min 离心 5 min。收集上层清液备用。

净化 移取 1.5 mL 样品提取液上层清液（7.1）于 2 mL 离心管中， 加入 150 mg 无水硫酸镁（4.4）和 50 mg N- 丙基乙二胺键合 固相吸附剂（4.8），于漩涡混合振荡仪（5.2）上以 2000 r/ min 速率振荡 2 min，以 4000 r/min 离心 5 min，收集上层清液， 待检测分析。

4. 实验结果 4.1 Auto SRM 优化部分化合物的离子对信息 TSQ 8000 Evo 的整个实验流程可以参考图 2。TSQ 8000 Evo 自带的 TraceFinder 软件有一个数据库，该数据库包含常规三 重四极杆串接气质上分析的 1000 多种化合物离子对信息，如 农药，环境污染物等化合物。所以，当我们需要完成手头上化 合物的方法建立时，可以首先参考数据库中的离子对信息。数 据库中查不到的化合物离子对信息，可以使用 TSQ 8000 Evo 特有的 AutoSRM 软件来自动完成。

AutoSRM 顾名思义就是可以自动优化化合物 SRM 离子对的软 件，该软件通过选择母离子，选择子离子，自动优化碰撞能 量这三个步骤可以完成方法优化，极大得简化了常规串接气质 建立化合物检测方法的步骤，节省了时间。赛默飞世尔科技全 新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪 TSQ 8000 Evo *的 AutoSRM 功能，可以自动优化离子对信息及碰撞能量，并且当 一次优化的化合物数目较多时，可以智能得调整进样的次数以 期在少的时间内得到优化的方法，使得整个方法建立部分 更加简单方便。

4.2 标准曲线 分别配置 5 ppb、10 ppb、20 ppb、50 ppb、100 ppb、200 ppb 的混标溶液，采用内标法定量，内标为莠去津或者三苯基磷酸酯（按 照保留时间来确定以哪种物质为内标，本实验保留时间在 20 min 之前的化合物都以莠去津为内标，20 min 之后以三苯基磷酸酯为 内标）。下表列出所有 122 种化合物的标准曲线方程以及线性相关系数，可以看出，应用 TSQ 8000 Evo 快速扫描检测这 122 种 化合物，可以得到良好的线性方式，有利于定量的准确性。

4.3 重现性及低检出限 用10ppb的样品重复进样5针，检测方法的重现性。所得的重现性结果如下图所示，所有的化合物的重现性在1.01%-9.69%之间（如 表 2 所示）。 分别配置 100ppt、200ppt、500ppt、1ppb 以及 2ppb 的样品，按照 S/N 为 3 和 S/N 为 10 来估算化合物的低检出限及低定量限。

4.4 烟草中农残检测的方法包 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提 出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的 能在 GC/MS 上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯 联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯等。方法包的作 用就是能使客户更快更简便得使用仪器，尽快上手。 方法包包括进样方法、数据处理方法（TraceFinder 方法文件 夹）、相关应用文章、相关标准、色谱柱信息、前处理方法， 数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成 化合物的定性定量分析。

由于 TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 进样方法而不是分时间段的 扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会 有微小的偏差，也不会影响终的结果。另外，TraceFinder 软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包 括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离 子、CAS 号等信息。同时，TraceFinder 软件可以根据数据处 理方法自动关联生成 TSQ 8000 Evo 的方法文件。这样应用 TraceFinder 就可以直接生成数据处理方法和部分进样方法。 整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作 信息。

想要快速建立方法时，直接拷贝方法包中的文件夹到 C:\ TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以在 TraceFinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法。

5. 结论： 应用 Thermo ScientificTM 三重四极杆串接气质联用仪 TSQ 8000 Evo，可以快速分析烟草中的农药残留。方法学验证表明，该 方法的线性、检出限、RSD 值均满足 YQ/T 47.1—2014 烟草及 烟草制品多种农药残留量的测定以及 YQ 50—2014 烟叶农药 大残留*的要求。应用 Thermo Fisher 方法包，可以快速建 立进样方法和数据处理方法，拿来即用，无需从数据库中整合 信息建立方法，而是直接用现成的方法，节省大量时间，提高 分析效率。一级和二级高分辨质谱数据，保证了定性和定量结 果的可靠性；媲美三重四极杆的灵敏度和宽线性范围可轻 松定量药物中的痕量杂质。与三重四极杆质谱相比，Q Exactive Focus 采用一级质谱定量不需要优化母离子，子离子参数，仅利 用目标化合物精密分子质量即可实现准确定量，更为方便快速。 采用二级高分辨质谱定量可以记录子离子全扫描信息，通过在 数据后处理中灵活的挑选更具有专属性的子离子进行定量，有 效的排除基质干扰，选择性更好，灵敏度更高。