安捷伦6550 iFunnel系统同时定性与定量分析丁螺环酮及其代谢物

及时快速的对代谢稳定性、代谢物鉴定及代谢物组成分析进行评估，对于加快优化先导 物和提高供试药物开发的成功率是非常关键的。带有多反应监测 (MRM) 的三重四级杆液质联用仪LC/MS 已经成为定量分析的主力军，如代谢稳定性和代谢物组成分析研究。然而，该方 法主要用于已知目标物的高灵敏度定量分析，但对于未知目标物的定性分析不是非常适 用。鉴于此原因，通常在不同类型的质谱上单独进行代谢物的鉴定分析（定性分析）。 由于传统串联质谱灵敏度的限制，往往需要相对较高的底物浓度（即 10-20 µM）在较大 范围内进行代谢物的鉴别。

在一台仪器上通过一次运行来完成定量与定性鉴别分析 (Qual/Quan)，既能显著提高代 谢稳定性研究、代谢物鉴别及代谢物组成分析研究的效率，又能提高测定效率和降低药 物研发的成本。本应用报告介绍了定性/定量分析的整体工作流程，以丁螺环酮 (1µM) 在 大鼠肝微粒体中的体外代谢研究为例，验证了安捷伦 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统 在代谢稳定性测定，代谢物鉴别和代谢物组成分析研究中的性能。

主要特点和优势

• 6550 iFunnel Q-TOF 能够在不降低数据 质量和分析速度的前提下，同时完成代 谢稳定性、代谢物鉴别和代谢物组成分 析的定性与定量研究。

• 低至 pg/mL 的高灵敏度实现了在 60 min 内对含有 1µM 丁螺环酮的大鼠肝微粒体 同时进行丁螺环酮及其代谢物的定量和 鉴别。

• MS 和 MS/MS 的亚 ppm 质量精度结 合出色的同位素保真度，能提供可靠的 代谢物鉴定和结构解析结果。

• 利用高 50 张图谱/秒的快速数据采集 速率可在 3.5 分钟的运行时间内实现准 确定量分析。

• MassHunter 代谢物 ID 软件在较宽范围 进行特征鉴定和 Novatia 自动转换算法， 极大促进了代谢物的鉴别。

• MassHunter 定量分析软件可提供快速 的批量数据采集和报告。

定性/定量一体化工作流程：定性/定量工作流程开始于生物样品进样到 LC/MS 系统（如图 1 所示）。使用安捷伦 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统时，数 据采集包括 MS 全扫描及数据依赖的三个 自动 MS/MS 扫描。MassHunter 代谢物 ID 软件有效的促进了代谢物鉴别和结构解 析。利用 MassHunter 定量分析软件的批 量模式采集数据并建立数据集，通过该数据 集进行代谢稳定性和代谢物组成分析研究。

定性/定量分析 图 2 显示了丁螺环酮的代谢稳定性和其代 谢物组成分析，并具体展示了 60 分钟内 丁螺环酮广泛范围的高丰度及低丰度代谢 产物。

图 3 显示了经过 10 分钟的处理后样品中丁螺 环酮单羟基代谢物的 MS 和 MS/MS 谱图。 母离子和碎片离子亚 ppm 的质量精度以及出 色的同位素保真度（总匹配度 >99%），实现了可靠的代谢物鉴别和结构解析。仅 3.5 分 钟时间即获得了良好的分离效果和广泛的代 谢物分析（如图 4 所示）。

结论：利用安捷伦 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 和 两种功能强大的工具软件（MassHunter 代谢物 ID 和定量分析软件）开发了一个 的定性/定量工作流程。安捷伦 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可对 1µM 经处 理的丁螺环酮同时进行定量和代谢物鉴定 分析，无论灵敏度还是通量或可信度均表 现。并且只需这一个分析平台便能快 速开发出 LC/MS 通用方法，而且也不必再 浪费时间为各个分析物进行 MRM 优化。