微生物实验全流程汇总：取样、稀释、接种、培养到鉴定完整指南

无论你是实验室萌新还是资深研究员，这篇指南都能成为你的“实验外挂”！

梯度稀释、微生物质谱…从操作到设备，附应用案例，助你实验效率翻倍！

一、       微生物取样方法

‌微生物取样的核心原则是‌无菌操作‌和‌代表性‌。根据样品类型选择合适的方法：

1.环境样品（空气、水、土壤等）

‌‌空气微生物‌：

沉降法‌：将平板培养基暴露在空气中一定时间（通常5-30分钟），收集沉降的微生物。

撞击式采样器‌：通过气流将微生物撞击到培养基表面，定量分析空气微生物浓度。

DW-20型 空气浮游菌采样器

仪器基于安德森空气采样器撞击法原理，采样时浮游菌高速通过微孔，撞击在培养皿琼脂表面，保证大于1μm颗粒全收集。

‌水样‌：采集前需充分混匀液体，用无菌瓶取中段水样（避免表面或底部杂质）。若水样含菌量高，需预先稀释（见下文稀释方法）。

DW-28系列 水中微生物膜过滤装置

仪器是对“包含少量微生物污染”水样进行微生物检测的新一代仪器，用于食品、化妆品、环境监测等水中微生物质量控制。

‌土壤/沉积物‌：使用无菌铲或钻取器取表层以下5-10 cm的样品，避免表层污染。样品需尽快处理或冷藏保存（4℃）。

‌2. 生物样品（人体、动植物组织）

‌表面拭子‌：用无菌棉签蘸取生理盐水，在目标表面旋转擦拭，放入无菌管中保存。

体液/组织‌：手术器械需灭菌，取样后迅速转移至无菌容器，避免暴露于空气中过久。

‌3. 工业样品（食品、发酵液等）

‌‌固体样品‌（如面包、肉类）：切取内部组织（避免表面污染），粉碎后悬浮于无菌生理盐水。

‌液体样品‌（如牛奶、果汁）：直接取10 mL加入90 mL无菌缓冲液中（10倍稀释）。

DW-JURAY系列 微生物样品自动重量稀释仪

仪器用于食品、药品、化妆品等含微生物样品的前处理自动稀释，可自动计算并完成对任意重量样品的准确稀释，使工作简易化，提高效率。

‌二、样品制备与预处理

‌‌1. 均质化处理

‌固体样品‌：加入无菌玻璃珠和缓冲液（如磷酸盐缓冲液），用均质器振荡至分散。

‌粘稠样品‌（如酸奶）：用无菌勺搅拌后稀释。

DW-4系列 拍击式均质器

仪器是微生物实验室进行“样品匀液”制备的最佳工具，可对样品进行均质处理，静音设计可使您摆脱噪音困扰。

2.去除杂质与抑菌物质

‌食品/环境样品‌：可能含防腐剂或抑菌成分，需通过以下方式处理：

过滤法‌：用0.45 μm滤膜去除颗粒，收集滤液中的微生物。

中和法‌：添加中和剂。

‌3. 富集培养（可选）

‌对低浓度微生物样品，可预先在液体培养基中孵育（如6-24小时），增殖目标菌群。

三、稀释方法：梯度稀释技术

‌稀释的目的是将高浓度样品中的微生物分散到可计数的范围（通常30-300 CFU/平板）。

‌操作步骤‌：

‌准备稀释液‌：常用无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液（PBS）。

‌梯度稀释‌：取1 mL原液加入9 mL稀释液中，混匀为10⁻¹稀释度。

重复步骤，依次得到10⁻²、10⁻³等梯度（每次更换移液枪头）。

‌选择稀释度‌：根据样品预估浓度选择3个连续稀释度（例如10⁻⁵、10⁻⁶、10⁻⁷）。

‌关键技巧‌：移液时枪头需浸入液面以下，避免气泡产生。每稀释一步需充分涡旋混匀（或手动震荡30秒）。

DW-9系列 微生物试剂分液器

仪器是一款精密输送液体的电子蠕动泵分液系统，1台设备即可实现“倾注平板制备”和“试管分装”等多种用途。

四、       接种方法

‌‌1. 平板划线法

‌目的‌：分离单菌落。

‌操作‌：用接种环蘸取样品，在平板表面划“之”字形线（分4个区域，每区灼烧接种环冷却后再划下一区）。

适用于细菌和真菌的纯化培养。

DW-6系列 接种环灭菌器

仪器采用红外线热能灭菌，在陶瓷漏斗管道深处灰化有机物质，可防止传染性溅污和交叉污染，是生物安全检测小型灭菌设备。

‌2. 涂布法

‌‌目的‌：定量计数菌落。

‌操作‌：取0.1 mL稀释液滴在平板中央，用无菌涂布棒均匀涂开。

适用于需氧菌的计数。

DW-16型 自动细菌涂布接种仪

仪器专为“经典培养法”微生物实验中的“细菌涂布接种”环节而设计，实现细菌涂布标准化。

‌3. 倾注法

‌目的‌：适合兼性厌氧菌或高温度敏感性微生物。

‌操作‌：将1 mL稀释液与约15 mL冷却至50℃的熔融培养基混合，摇匀后凝固。菌落分布在培养基内部，避免表面污染。

4.螺旋接种法

目的：高效估算样品中微生物浓度，减少手动稀释步骤和人工操作步骤，提高效率。  

操作：仪器将会自动完成螺旋接种，菌落将沿螺旋轨迹分布于平板表面，中心密度高、外周密度低。

DW-L2000型 全自动微生物平皿螺旋接种仪

仪器依据阿基米德螺旋，以递减比率自动接种样本，可实现标准化生成大量单颗菌落，方便后续菌落计数、分离纯化等需求。

五、       培养条件设置

‌‌1. 培养基选择

‌‌通用培养基‌：营养琼脂（细菌）、PDA（真菌）、LB培养基（大肠杆菌等）。

选择性培养基‌：加入特定抑制剂或指示剂（如SS琼脂分离沙门氏菌）。

‌2. 温度与时间

‌细菌‌：37℃（中温菌），培养24-48小时。

‌真菌‌：25-30℃，培养3-7天。

环境微生物‌：需调整温度（如嗜热菌55℃）或气体条件（厌氧罐）。

‌3. 气体环境

‌需氧菌‌：普通培养箱。

厌氧菌‌：使用厌氧袋/罐，或添加还原剂（如巯基乙酸盐）。

‌微需氧菌‌：5% O₂、10% CO₂环境（如弯曲杆菌）。

嗜CO₂菌：高浓度CO₂环境（如嗜肺军团菌）。

DW-100A-K Plus 智能厌氧微生物培养系统

仪器可根据需要选择特定O2浓度（0%-18%可选）和CO2浓度（0%-35%可选），快速生成环境，稳定可靠，重现性100%。

六、定量方法

1、菌落计数：

可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。

DW-V系列 全自动菌落计数仪

仪器用于微生物菌落的快速读数和统计，全自动运行，支持多种菌落形态的自动统计。同时软件具备智能识别技术，可对平皿上所有菌落进行高通量表型分析，包括菌落大小、圆度、表型形态、边缘特性等。

2、比浊法：

微生物的生长引起培养物混浊度的增高，通过测量悬浮液中的微生物细胞散射光来反映微生物数量。

DW-MF40型 微生物麦氏浊度仪

仪器采用麦氏浊度标准溶液进行标定，直接显示麦氏单位浊度值，可用于测定待鉴菌悬液中细菌浓度，制备标准麦氏浊度的菌悬液，为细菌鉴定和药敏试验提供样品质量保证。

七、定性方法

1、形态学观察

包括革兰氏染色及镜检。可以初步鉴定微生物的革兰氏阴阳性、球菌或杆菌。（革兰氏染色仪、显微镜）

DW-GS100型 全自动革兰氏染色仪

仪器依靠创新垂直喷雾染色方法，从各类型样品中快速获取标准化的染色结果。

DW-3系列 生物显微成像系统

系统采用光学设计，DCIS无限远光学系统，超大而平坦的视场，得到光学成像质量。

2、生化鉴定

通过生化反应原理（包括酶底物反应、糖利用反应、同化反应、氨基酸实验等）捕获细菌的生化表型特征，对微生物进行鉴定。

DW-M80型 自动微生物生化鉴定系统

仪器通过生化反应原理捕获细菌生化表型特征对微生物进行鉴定，可鉴定550种以上常见微生物，并作耐药分析。

DW-M3270型 全自动微生物鉴定及药敏分析仪

配备更自动化的操作流程，更智能的数据比对功能，鉴定结果迅速且精准输出。操作板卡加样读取交予机器，避免误差；全程板卡条码追踪，整流程跟随溯源；板卡界面一目了然，多层次多维度提升效率。

3、蛋白质谱鉴定

通过采集微生物菌体经软电离后产生的蛋白质、多肽等组分的加氢离子质谱，与标准菌株质谱进行比较分析而得出鉴定结果。

DW-MS 5500型 飞行质谱微生物快速鉴定系统

系统主要用于微生物的快速鉴定，可在30分钟内完成96个微生物分离株的“种”级别鉴定。还可进行聚类分析、耐药性分析、同源性分析、混合菌分析、主成分分析等科研。

4、分子测序

基于微生物的DNA序列的鉴定，包括全基因组测序、16s rRNA/ITS序列分析、DNA（G＋C）含量百分比测定、DNA-DNA杂交及靶基因PCR等。

从理论到实践，从手动到智能。解锁这份微生物实验的“百科全书”，让每一次实验都成为技术进阶的基石。探索微生物世界的奥秘，杭州大微与您同行。