GB 4789.9-2025实战宝典：弯曲杆菌检验，看这一篇就够了

弯曲杆菌（Campylobacter）是一类革兰阴性、弯曲状、高运动性的微需氧杆菌，通常是食物中毒的常见病原体之一，在低氧环境下生长，可通过动物、食物和水进行传播。

弯曲杆菌在血平板上的可疑菌落（确认阳性）

对食品中弯曲杆菌的检验主要参照GB 4789.9-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验》。

弯曲杆菌检验步骤：

一、样品前处理

1、取25g生禽内脏样本10倍稀释

2、遵循标准中的一般样本的处理过程，使用[杭州大微DW-4均质器]进行均质处理

3、滤过液以12000g 4℃离心15min后弃去上清

二、增菌与培养

1、增菌液接种

2、使用[杭州大微DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统]，选择“弯曲菌”操作程序

3、30秒后，气体环境生成，将培养罐脱离主机，放入42℃±1℃环境培养24h~48h

4、可疑菌种纯化培养

三、鉴定

可使用生化实验、实时荧光PCR或更为快速简便的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱-[杭州大微DW-MS 5500飞行质谱微生物快速鉴定系统]进行鉴定

空肠弯曲杆菌蛋白谱图

弯曲杆菌实验操作注意事项：

1、必须严格维持 5% O₂、10% CO₂、85% N₂的微需氧气体环境，气体失衡会直接造成目标菌不生长，批量假阴性。

2、空肠/结肠弯曲杆菌为嗜热型，全程培养需统一控温42℃。

3、关于滤膜操作：膜和平板表面充分贴合，加样后静置等待滤膜上的液滴充分透过滤膜后再揭去滤膜。

4.琼脂平板应采取倒置培养方式。若正置培养，培养基冷凝水、样品残留水分易滴落扩散至菌落生长表面，造成菌落蔓延融合，破坏典型菌落形态，不利于后续可疑菌落的观察与鉴别。

5、弯曲菌对冷冻、干燥、常温耐受极差，样品采集后 2h 内检测，暂存仅 2～8℃冷藏；冷冻会大量致死菌体，直接出现假阴性；高风险肉制品必须缩短室温放置时间。

6、每块平板至少挑取 5 株典型菌落纯化，菌落挑取不足、只使用一种平板是弱阳性样品漏判主要原因。

大微实验室验证结果：

1、在本轮实验中同时运用GB 4789.9-2025国家标准法和双孔滤膜法进行实验，结果显示采用国家标准法，空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌均检出；采用双孔滤膜法，结肠弯曲杆菌检出。

2、本实验采用的GB 4789.9-2025国家标准法所用培养基及试剂（0.1%蛋白胨水、弯曲菌增菌液、哥伦比亚血琼脂、卡玛丽血琼脂）均采购于青岛海博。

3、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法可准确鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌（本实验所运用的验证仪器为DW-MS 5500飞行质谱微生物快速鉴定系统）。