特色应用 | 去磷脂板助力LC-MSMS精准测定人血清中衣康酸含量

Shimadzu LC-40BX3与LCMS-8050 RX联用系统；

色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-30807-02）；

96孔磷脂去除板：SHIMSEN Phospholipid Removal 96-well plate（2 mL；P/N： 380-05120-04 ）；

96孔空板： SHIMSEN 96-Well Plate Sample plate（1.0 mL；P/N： 380-00802 ）；

96孔正压装置：Orochem EZYPRESS HT 96 Positive Pressure Processor （P/N： ORPSP HT 96 ）；

96孔氮吹装置： Orochem QUIKVap - 192, two 96-well plate format evaporator （P/N： QUIKVap - 192 ）

UHPLC条件：

流速：0.3 mL/min；

进样量：10 μL

柱温：25 ℃

流动相：A：0.1%甲酸水

             B：0.1甲酸乙腈

梯度洗脱程序如下：

质谱条件：

离子化模式：ESI，负离子扫描； 

扫描模式：多反应监测（MRM）

碰撞气：氩气 加热气：

干燥空气 10 L/min

雾化气：氮气 3 L/min                              

干燥气：氮气 10 L/min

接口温度：300℃                                      

DL温度：200 ℃

加热模块温度：320 ℃

MRM参数见下表：

取400 μL 1%甲酸乙腈溶液（含内标1.25 ng/mL）至于磷脂去除板孔中，加入100 μL人血清样本，使用移液枪反复抽吸3-5次混匀。将磷脂去除板放于1.0 mL 接收板上方，调节正压装置压力，控制液体以3-5s/滴流出，接收全部流出液。使用氮吹装置将流出液氮吹至近干，加入100 μL 10%甲醇水（含1%甲酸）溶液，混匀复溶，待检测。

图1  样品前处理流程图

图2  血清样品图谱

图3  经过去磷脂板处理后的色谱图对比

? 经上述方法检测，待测血清样本中的衣康酸含量为0.89 ng/mL

? 磷脂去除板对磷脂化合物的去除效果明显（磷脂化合物m/z 184.1 母离子扫描）。