SCIEX Triple Quad™ 6500+质谱系统检测细胞中的能量代谢物

研究背景

细胞能量代谢研究对于理解细胞代谢途径和药物作用机制具有重要意义。能量代谢物（如ATP、ADP等）在液相质谱分析中易与金属离子络合，导致分析灵敏度降低。

实验方法

1. 液相色谱条件：

   - 流动相：A相为90%水（含20 mM乙酸铵和5 μM亚甲基二膦酸），B相为90%乙腈（含20 mM乙酸铵和5 μM亚甲基二膦酸）。

   - 流速：0.3 mL/min。

   - 柱温：40℃。

   - 梯度洗脱：通过表1所示的时间和流动相比例进行梯度洗脱。

2. 质谱条件：

   - 数据采集方法：多反应监测（MRM）。

   - 离子源：电喷雾离子源（ESI），正负模式切换。

实验结果

1. 峰型和灵敏度：

   - 通过优化流动相条件（加入亚甲基二膦酸），显著改善了能量代谢物的峰型，提高了检测灵敏度。

   - 正离子模式和负离子模式下目标化合物的提取离子流图分别见图1和图2。

2. 数据分析：

   - 对12个细胞样品（6个给药组和6个对照组）进行靶向分析。

   - 通过统计分析（p-value < 0.01和VIP > 1），筛选出92种显著变化的代谢物。

   - 热图（图3）显示，给药组和对照组之间存在显著差异。在top 25化合物中，给药组中腺苷、鸟苷等14种物质含量升高，而脱氧鸟苷三磷酸、甘氨酸等11种物质含量降低。

方法特点及优势

1. 检测能力：

   - 在SCIEX Triple Quad™ 6500+系统上建立了330种能量代谢物的检测方法，适用于高通量靶向分析。

2. 性能优势：

   - 该系统具有高灵敏度和强抗基质干扰能力。

   - 简化了样品前处理流程，回收率和仪器重复性良好。

   - 本土化产品性能与进口产品相当，为能量代谢物的差异分析提供了快速可靠的方法。

结论

本文建立的检测方法能够高效准确地分析细胞能量代谢物的变化，为药物作用机制研究提供了有力工具。