使用7000D三重四极杆气质 联用系统测定化妆品中的十种挥发性 亚硝胺

前言常见的亚硝胺类化合物 N-二甲基亚硝胺 (NDMA) 在各个领域都是引发高度关注的致癌物，其不仅在药品中，而且在水中和食物（包括熏肉、烤肉、奶制品和蔬菜）中均有发现。《化妆品安全技术规范》（2015 年版）[1] 将亚硝胺类列为化妆品禁用组分，同时化妆品限用组分列表中要求：仲链烷胺最大含量 0.5% 且不和亚硝基化体系一起使用以避免形成亚硝胺，产品中亚硝胺最大含量 50 μg/kg。事实上，亚硝胺类物质的产生途径除仲胺和亚硝化试剂的生产工艺原因以外，还可能来源于污染引入以及降解途径。国家药品监督管理局药品审评中心于 2020 年发布的《化学药物中亚硝胺类杂质研究技术指导原则（试行）》[2] 中强调“亚硝胺类杂质在人体中可接受限度较小，微量杂质的检测和控制难度大”，应采取“避免为主，控制为辅的策略”。国家药品监督管理局发布的《化妆品安全评估技术导则（2021 年版）》[3] 中也提及亚硝基化合物属于强致癌物，需要进行相应的安全评估。总之，亚硝胺类化合物的存在较为普遍、容易被引入，并且毒性大、检测难，开发相应的高效、高灵敏度检测方法十分必要

《化妆品中 N-亚硝基二甲基胺等 10 种挥发性亚硝胺的测定气相色谱-质谱/质谱法》(GB/T 29669-2013) [4] 中提出了利用 GC-MS/MS分析化妆品中 NDMA 等十种挥发性亚硝胺的方法，该方法对 NDMA的定量限为 10.0 mg/kg；而 2021 年公布的《食品安全国家标准 食品中 N-亚硝胺类化合物的测定（征求意见稿）》(GB 5009.26) 中第二法 QuEChERS-气相色谱-质谱/质谱法的定量限为 1 μg/kg。相比较而言，后一种方法中使用的 Agilent Bond Elut EMR-Lipid增强型脂质去除产品使得样品前处理更加简便快速，并且结合安捷伦多模式进样口 (MMI) 的溶剂放空模式，可进一步提升方法灵敏度。本应用简报介绍了一种使用 Agilent 7000D 三重四极杆气质联用系统同时检测化妆品中十种挥发性亚硝胺的方法。该方法使用Agilent Bond Elut EMR-Lipid 对洗发水样品进行前处理，并结合多模式进样口 (MMI)，实现了简单、高灵敏度、准确可靠的亚硝胺定量分析（目标化合物及两种内标的信息见表 1）。

实验部分试剂和样品亚硝胺标准品及内标均购自百灵威科技有限公司，乙腈（质谱纯）购自 JT Baker。样品购自本地超市。仪器和设备采用 Agilent 8890 气相色谱系统和 7000D 三重四极杆气质联用系统，该仪器系统配备多模式进样口 (MMI)、Agilent 7693A 自动液体进样器和 MassHunter 数据处理工作平台。目标物的采集离子对选择和碰撞能量优化由 MassHunter Optimizer 自动优化程序完成。

标准溶液的配制将亚硝胺目标物标准品及其内标混合，使用乙腈配制成5.0–500 μg/L 的校准标样，其中内标浓度为 100 μg/L，进样至 GC-MS/MS 进行分析，并通过内标法进行定量。样品前处理使用乙腈提取，并使用 EMR-Lipid 分散固相萃取进行净化，详细的样品前处理流程见图 1。简言之，移取 1 g 样品加入 5 mL 乙腈中振荡提取；离心后取上层乙腈提取液加入 Agilent Bond ElutEMR-Lipid dSPE 增强型脂质去除净化管（部件号 5982-1010）中；振荡离心后，将上清液倒入 Agilent Bond Elut EMR-LipidPolish 反萃管（部件号 5982-0101）中，以去除多余水分并改善分析物分配；再次振荡离心；然后取 1 mL 上清液过有机相滤膜后，进样至 GC-MS/MS 进行分析。

气相色谱条件色谱柱： Agilent DB-HeavyWAX 毛细管柱，30 m × 0.25 mm，0.25 µm（部件号 122-7132）进样口衬管： 单锥不分流超高惰性衬管，带玻璃毛（部件号 5190-2293）进样体积： 1.0 μL（不分流模式）；5.0 μL（溶剂放空模式）载气： 氦气，恒定流速，1.0 mL/min进样口温度： 程序升温，初始温度 60 °C，保持 0.16 min，以 900 °C/min 的速率升至 220 °C进样方式： 不分流模式、溶剂放空模式（详细方法开发过程参见安捷伦应用简报 5994-2222ZHCN[5]）升温程序： 40 °C 下保持 0.5 min，以 15 °C/min 的速率升至190 °C，再以 40 °C/min 的速率升至 260 °C，保持5 min

质谱条件溶剂延迟： 5.5 min离子化方式： EI离子源温度： 250 °C四极杆温度： 150 °C接口温度： 250 °C检测模式： MRM（离子对信息见表 2）定量方法： 内标法，各化合物定性定量离子对见表 2