安捷伦气质联用分析沙坦类药物中的亚硝胺杂质

为应对氦气短缺问题，实验室正在探索用于气质联用 (GC/MS) 分析的替代载气。本应用简报将 Agilent 8890 气相色谱系统与配备高效离子源 (HES) 的 Agilent 7010 系列三重四极杆 (TQ) GC/MS 系统联用，或与配备 Agilent HydroInert 离子源的 Agilent7000E 三重四极杆 GC/MS 联用，证明了氢气作为载气用于分析某些沙坦类药物中的八种亚硝胺杂质的适用性，并与氦气进行了比较。使用氢气作为载气分析 8 种亚硝胺杂质，其 NIST 检索匹配分数在 79 到 97。在 0.3–50 ng/mL 的浓度范围内获得了出色的校准线性，R2 > 0.99。当浓度为 0.03 ppm 的时候，满足信噪比 (S/N) 为 10的要求。OpenLab ECM XT 与 MassHunter 采集软件 13.0 的集成简化了数据管理，为分析人员提供了对仪器所生成的数据的集中访问，可促进协作、保持数据可靠性并优化工作流过程。

前言多年来，氦气供应一直是一个问题，这导致对以包括氢气在内的其它可用气体作为载气的关注显著上升。虽然氢气是一种高效的 GC 载气，但了解其与分析物的反应性对于获得准确的结果至关重要。与氦气相比，氢气具有一些优势，包括分析速度更快且色谱分离度更出色。然而，氢气也面临一些挑战，例如可能导致灵敏度降低以及氢气与样品分析物发生反应所引起的谱图变化。这些反应会改变总离子流色谱图 (TIC) 中峰的质谱图，可能导致化合物鉴定出错。从氦气换用为氢气作为载气是一项重大变化，需要仔细规划和执行。“EI GC/MS 仪器载气由氦气转换为氢气的指南[1]”提供了详细说明来帮助实现载气转换。另外，安捷伦推出的 HydroInert 离子源能够保留谱图保真度，即使活性化合物在氢气存在的情况下也是如此。目前以氢气作为载气已经在各种应用当中获得成功，包括挥发性有机化合物[2]、多环芳烃 (PAHs)[3,4] 以及 EPA TO-15 中列出的目标化合物[5] 的分析。除这些热门应用以外，另一项重要应用是药品中亚硝胺杂质的分析。氦气作为载气被广泛应用于分析药品中的亚硝胺杂质。亚硝胺在某些条件下可能与氢气发生反应，转化为不需要的胺或肼。因此，使用氢气作为载气时确定谱图质量不受影响非常重要。本应用简报评估了以氢气作为载气，分别使用 HES和 HydroInert 离子源分析以下八种亚硝胺杂质的结果：亚硝基二甲胺 (NDMA)、N-亚硝基甲基乙胺 (NMEA)、N-亚硝基二乙胺 (NDEA)、N-亚硝基-乙基异丙胺 (NEIPA)、N-亚硝基二异丙胺 (NDIPA)、N-亚硝基二丙胺 (NDPA)、N-亚硝基二正丁胺(NDBA) 和 N-亚硝基哌啶 (NPIP)。对检测结果从谱图质量、线性、重复性、回收率以及与关于药品中亚硝胺分析的现行法规的合规性方面进行了评估。

实验部分所检测的活性药物成分 (APIs) 和药品包括缬沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦和奥美沙坦。准确称取 500 mg 原料药，置于一次性 15 mL 玻璃离心管中，并使用移液管加入 5 mL 内标溶液（约 50 ng/mL NDMA-d6 的二氯甲烷溶液）。将样品涡旋1 min，然后放入离心机中，以 4000 rpm 离心 5 min。未溶解的原料药沉降在底部。使用一次性移液器，将约 2 mL 二氯甲烷层通过 0.45 µm 尼龙过滤器过滤，然后转移至 GC 样品瓶中待分析。标样配制稀释标准品储备液，以获得 0.3–50 ng/mL 范围内的校准溶液，并且使用含有作为内标的 NDMA-d6 的二氯甲烷进行配制。

仪器和分析将配备 Agilent 7693A 自动液体进样器 (ALS) 的 8890 气相色谱系统与配备 HES 的 7010 系列 GC/TQ 和配备 HydroInert 离子源的 7000E GC/TQ 联用进行分析。采用 Agilent J&W VFWAXms 气相色谱毛细管柱 (60 m × 0.25 mm, 0.25 µm)（部件号 CP9207）进行分离。或者，可以使用包含两根 Agilent J&WVF-WAXms 气相色谱毛细管柱 (30 m × 0.25 mm, 0.25 µm)（部件号 CP9205）的柱中反吹配置应用相同的参数，流量分别为1 mL/min 和 1.2 mL/min。还对反吹装置进行了评估。表 1 和表 2 分别提供了 GC 和 MS 参数。GC/TQ 在动态多反应监测 (dMRM) 模式下运行。利用 GC/TQ的 Agilent MassHunter Optimizer 软件优化所有九种杂质的MRM 离子对，并将其用于数据采集（表 3）。

软件和数据可靠性采用 Agilent MassHunter Workstation（包括用于 GC/MS的 MassHunter 采集软件 13.0 和 MassHunter 定量分析软件 12.1）进行数据采集和分析。OpenLab 电子内容管理系统 (ECM) XT 配置提供了各种功能来确保符合各个国家/地区和欧盟电子记录法规的要求。自动化工具和过程能够创建具有相关权限的用户、生成审计追踪并支持远程数据存储，以尽可能降低数据泄露或丢失的风险。OpenLab ECM XT 与MassHunter 应用程序配合使用，提供了一种灵活的数据管理解决方案，能够单点访问由仪器、数据系统和实验室软件生成的数据。通过访问存储位置的数据，分析人员可以在不损害数据可靠性的情况下进行协作，并且能够为工作流程创建一致的流程。

结果与讨论谱图匹配质量使用氦气或氢气作为载气采集所有八种分析物的全扫描谱图，然后与 NIST 谱库进行比较。如图 1 所示，使用氢气作为载气与 7010 系列 GC/TQ-HES 系统获得了出色的匹配得分 (> 90)。当使用氢气作为载气与 7000E GC/TQ-HydroInert 离子源配置时，获得了良好的匹配得分 (> 80)。使用 HES 获得了更高的平均匹配得分可归因于更高的灵敏度所带来的更高的响应。保持质谱图的完整性使氦气和氢气作载气方法能够使用相同的MRM 离子对（表 3）。

……

结论在 Agilent 8890 气相色谱系统与 Agilent 7010 系列 GC/TQ(HES) 或 Agilent 7000E GC/TQ（HydroInert 离子源）联用系统上使用氢气作为载气时，在沙坦类药品和原料药的八种亚硝胺药物杂质的测定中表现出优异的性能。在 0.03 ppm 下对性能进行了验证，获得了可接受的回收率和长期重复性。配备 HydroInert 离子源的 7000E GC/TQ 和配备 HES 离子源的7010 系列 GC/TQ 均有助于系统获得所需的检出限。OpenLabECM XT 与 MassHunter 采集软件 13.0 的集成简化了数据管理，为分析人员提供了对仪器所生成的数据的集中访问，可促进协作、保持数据可靠性并优化工作流过程。