液质联用检测头孢地尼中有关物质

药品杂质是反映药品质量的重要指标，人用药品注册技术要求国际协调会议（Internat ional Conference of Harmonizition ICH）要求：表观含量>0.1%的杂质应进行定性分析；常规的杂质定性分析方法通常采用分离制备杂质纯品，再进行波谱学方法解析。

近年来，越来越多的利用液质联用技术分析有关物质的含量及定性。但目前药典中很多的有关物质分析的方法，均采用非挥发性缓冲盐，甚至添加了离子对试剂作为流动相，因此不能直接进入质谱分析，给杂质定性带来了很大的挑战，导致应用出现局限性。本方法介绍了采用柱切换二维液相色谱分离-质谱定性的方法，来解决此类问题，对一维上洗脱下来的杂质等目标化合物经过阀切换至二维色谱柱，在二维色谱柱上进行除盐后，再进质谱进行定性分析，通过质谱裂解规律，寻找杂质可能产生的来源以及形成的机理，取得了较好的效果。本实验仪器连接图见图2-14

头孢地尼，属第3代头孢，其结构见图2-13。胶囊剂：50 mg/粒，100 mg/粒，由日本藤泽药品工业公司原研，1991年日本上市，商品名Cefzon，1997年12月被美国上市，1999年在韩国上市，2001年国产头孢地尼获准在中国上市。该品用于对头孢地尼敏感的葡萄球菌属、链球菌属、肺炎球菌、消化链球菌、丙酸杆菌、淋病奈瑟氏菌、卡他莫拉菌、大肠埃希菌、克雷伯菌属、奇异变形杆菌、普鲁威登斯菌属、流感嗜血杆菌等菌株所引起的感染。

一维分析柱：Acclaim 120 C18，5 µm，4.6×150 mm，P/N：059148；二维色谱柱：Acclaim PAII，3 µm，3.0×50 mm， P/N：068973MS工作参数：1） Full Scan，ESI源，正离子模式，M/Z: 100-600；负离子模式：100-600；Scan time 0.4S。2） 子离子扫描（母离子根据full scan扫描得到）：正负离子同时扫描，Full scan M/Z=100-600，Scan time 0.2s，FWHM 0.70，CE 10V，Energy Ramp: 40eV3）调谐参数：电压：2200 V；雾化温度：350℃；鞘气压力：35 psi；辅助气压力：10 psi；毛细管温度：300℃。

一维分析流动相（右泵），梯度程序见表2-9：流动相A：0.25%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH=5.5）1000 mL，加入0.l mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4 mL；流动相B：0.25%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH=5.5）-乙睛-甲醇=500-300-200，加入0.1 mo1/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4 mL。二维分析流动相（左泵），梯度程序见表2-10：A：0.005 mol/L醋酸铵，pH用乙酸调节至5.5；B：乙腈。阀切换时间见表2-11，测定谱图见图2-15、2-16。柱温：40℃；进样体积：20.0 µL；检测波长：254 nm。

根据破坏样品紫外谱图，发现热破坏杂质峰更多，因此，选用热破坏样品进行杂质分析。从图可以看出，9号峰为主峰头孢地尼，其他峰为杂质峰，分别对6、7、9、10、12、15号峰等进行了阀切换，把每个峰先切到定量环里，然后再启动左泵洗脱除盐后，进质谱分析。图2-16为质谱上进样阀除盐切换时间试验图谱。从图2-16可以看出，上图为负离子模式，M-H为291.1，是EDTA盐；正离子模式下，M+H 74.1为四甲基氢氧化铵盐，因此，要把流动相中的盐去除干净，需要找到合适的质谱上的进样阀的切换时间，把这两个峰进行切除，流入废液。在本试验中，质谱进样阀的切入时间约为4.0 min（以六通阀切换进样后开始计算）。通过该方法，对每一个杂质进行单独切换后，通过定量环转移至二维色谱柱上，再采用与质谱兼容的流动相，把二维色谱柱上保留的盐份去除掉，然后把目标化合物洗脱下来，进质谱分析，该方法取得了较好的结果，解决了相关难题，最终分析结果见下表