研究案例」基于QTRAP质谱，中药注射剂活性成分鉴定策略

天津中医药大学的研究学者通过QTRAP^® 系统*的多种采集模式复合联用的方式，采用四种扫描模式（EMS-IDA-EPI，Pre-IDA-EPI，NL-IDA-EPI，pMRM-IDA-EPI）互为补充的新策略，并结合LightSight^™软件自动预测相似结构未知物的功能，提出了一种新颖、灵敏且简单的策略，用于系统、高效、快速的分析鉴定SLI中的活性成分。

从 SLI 中鉴定出总共 171 种化合物。其中，27个痕量成分以前没有报道过。这种策略可以显著提高对于SLI中大量痕量活性成份的鉴定及异构体的区分，从而全面的鉴定到SLI中不同含量分布的活性成份。另外，对定性结果选出的13个代表性成份在15批次SLI中进行准确定量。其中，丹酚酸 A (Sal A)、Sal B、Sal D、紫精酸 (LA) 和迷迭香酸 (RA) 被证明是主要成分。

研究表明，这种新策略可以显著提高对于未发现的化学成分的鉴定，为鉴定其它中药的有效成分提供了很好的思路。

样品：制备样品SLI时，用1 mL超纯水稀释。离心，过滤，上机分析。

标准品信息：：

标准品：丹参素、咖啡酸、阿魏酸、异芥酸、丹酚酸C、原儿茶酸、紫草酸、香草醛酸、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸D、原儿茶酸醛、迷迭香酸。

通过将标准溶液与10%ACN的混合物连续稀释，制备了一系列工作标准溶液。

如图3所示，将pMRM、EMS、Prec和NL四种采集方式进行了韦恩图汇总，表明四种采集方式均有各自的优势。在这四种扫描模式的帮助下，共鉴定到171种成分（详见原文），其中12种与标准品对照确认，保证鉴定准确度。由于pMRM 模式出色的灵敏度和选择性，可鉴定多达168 种化合物。EMS扫描模式排在第二位，检测到 76 种成分；Prec 和NL扫描模式大约有30个成份。这些成份主要分为以下类型：单体、二聚体、三聚体、四聚体酚酸及其异构体和衍生物（即糖基化、烷基化、水解、脱氧、脱羧、脱氢、氧化等）。此外，27种痕量成分以前从未报告过。

根据QTRAP质谱的复合式扫描方式，首先使用基于QTRAP质谱的EMS-IDA-EPI 扫描来获取非靶向化学信息，可以全面挖掘分析物的MS碎片信息。然后利用代表性组分的典型碎片离子进行半靶向的Prec和NL-IDA-EPI 扫描，可以选择性地检测与母核结构相似的化合物，从而得到更多结构相关且含量相对较高的化合物。随后，总结了碎片离子的特征和典型性，以及可能的衍生代谢途径，开发出灵敏度和选择性更高的pMRM-IDA-EPI 扫描方法，从而鉴定到不同浓度水平的活性成份，尤其是痕量化合物。因此，EMS、Prec和NL-IDA-EPI可以被视为pMRM-IDA-EPI 的有利补充策略，以获取更多对结构解析有用的片段信息。

如图4所示，化合物48和50（图4A和4B）通过EMS检测到，而47和38（图4C和4D）通过Prec（m/z109）和NL（198Da）分别检测到。

所有13种分析物均显示出良好的线性关系，线性相关系数r值大于0.997。通过向样品中添加低中高三个浓度的加标回收实验，从而考察本方法的回收率和精密度。对每种浓度水平进行一式三份分析，目标化合物的回收率在77.05%到99.30%之间，RSD值在0.45%到5.80%之间。

通过SLI的15批次样本进行定量分析，从图7可以看出，13种成分的含量差别很大。丹酚酸A（Sal A）、Sal B、Sal D、紫草次酸（LA）和迷迭香酸（RA）是主要成分。其中，Sal B的含量最高（195.08-350.46μg/mg），然后是LA、Sal A和RA。但是，香草醛、阿魏酸、Sal C、原儿茶醛和原儿茶酸的含量较低，这些也是SLI的重要活性成分。