三重四极杆质谱联用同时测定芝麻酱中的 26 种真菌毒素

摘要：本应用简报介绍了一种定量测定芝麻酱中 26 种真菌毒素的方法，该方法基于 Liu 等人发 表的论文 [1]。首先使用实验室开发的改良 QuEChERS 方案对样品进行萃取和净化，然后 用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统串联 Agilent 6460 三重四极杆质谱仪对所得的溶液 进行分离和检测。本文开发的方法经过基质匹配外标校准，具有非常出色的线性动态范 围，相关系数达到 0.995 或更高。利用该方法检测了 26 种真菌毒素，其定量限 (LOQ) 几 乎均低于当前中国、欧盟及其他监管机构规定的相应最大残留水平 (MRL)。加标实验表 明，大多数回收率都在 60% - 120% 的范围内，各种分析物的 RSD 均低于 15%。本研究 开发的方法具有*的灵敏度、选择性和准确度，并且具有较高的通量，适用于对实际 样品中的真菌毒素进行目标物筛查。

前言：各种农产品（包括原材料和加工后的食品）容易受到真菌毒素的 污染，在适宜的气候条件下，真菌毒素主要由曲霉属、青霉属、 镰刀菌属以及许多其他真菌物种分泌产生。这些真菌毒素多数都 含有ju毒，甚至具有致癌性 [2,3]。目前，真菌毒素已受到许多机 构的监管，尤其是在主要农产品（例如，谷物、玉米、牛奶和食 用油）中 [4]。食品中真菌毒素的常规监测需要采用极其灵敏且可 靠的方法。 过去十年间，高效液相色谱与质谱尤其是串联质谱的联用系统 (HPLC-MS/MS) 通过与免疫亲和净化 (IAC) 或固相萃取 (SPE) 相 结合，已被应用于真菌毒素的检测中。QuEChERS 是一种更通用 的萃取和净化方法，该方法已被扩展至分析一些常见食品基质 （例如，小麦、面粉、谷物、葡萄酒等）中的真菌毒素 [5-7]。然 而，芝麻酱作为另一种更加复杂的食品基质，尚未得到深入分析。 芝麻酱主要由芝麻和花生制成，容易受到多类真菌毒素的污染， 从而可能导致人类健康风险的增加。这种酱富含脂肪、碳水化合 物、蛋白质和天然色素，因此很难净化。本研究的目的是通过结 合通用的 QuEChERS 方法与超高效液相色谱/质谱串联系统 (UHPLC-MS/MS)，开发出一种可靠的方法，对芝麻酱中的 26 种 常见真菌毒素进行高通量测定。

实验部分 材料和试剂 真菌毒素标准化合物：新茄病镰刀菌烯醇 (NEO)、呕吐毒素 (DON)、3-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (3-ADON)、15-乙酰基-脱 氧雪腐镰刀菌烯醇 (15-ADON)、黄曲霉毒素 B1 (AFB1)、黄曲霉毒 素 B2 (AFB2)、黄曲霉毒素 G1 (AFG1)、黄曲霉毒素 G2 (AFG2)、 黄曲霉毒素 M1 (AFM1)、黄曲霉毒素 M2 (AFM2)、T2 毒素、HT-2 毒素、伏马菌素 B1 (FB1)、杂色曲霉素 (ST)、疣孢青霉原 (VER)、 赭曲霉毒素 A (OTA) 和玉米烯酮 (ZEN) 购自 Alexis Corporation； 4,5-二乙酰氧基镰草镰刀菌醇 (DAS)、镰刀菌烯酮-X (FUS-X)、脱环 氧-呕吐毒素 (DOM-1)、胶霉毒素 (GLT)、烟曲霉素 (FUM)、伏马 菌素 B2 (FB2)、伏马菌素 B3 (FB3)、霉酚酸 (MPA) 和蕈青霉素 (PAX) 购自 Romer Lab。一些试剂（例如甲醇、乙腈、甲酸、乙 酸铵和水）为 HPLC 级。其他试剂均为分析纯级并购自本地供应 商。定制的 QuEChERS 萃取（EN15662 方法）试剂盒和分散净 化管均购自安捷伦科技公司。 样品萃取和净化 称取样品 (2.5 g) 加入 50 mL 离心管中，并采用两种不同的溶液依 次对样品萃取 30 分钟：20 mL 含 0.1% 甲酸的 80% 乙腈水溶液和 5 mL含 0.1%甲酸的 20%乙腈水溶液。在每次萃取后，均对样品瓶 进行离心，并收集上清液。然后将两次收集的上清液混合在一起， 并使用安捷伦 QuEChERS 萃取试剂盒（部件号 5982-5650CH） 通过立即涡旋振荡 1 分钟后在 8000 rpm 下离心 5 min 以进行盐析。 然后将上清液转移至洁净的样品瓶中，并使用 20 mL 正己烷进行 萃取，除去脂质。将保留在下层的分析物转移至包含 150 mg C18 和 900 mg 硫酸镁的安捷伦 dSPE 净化管（部件号 5982-4956CH） 中。涡旋振荡浑浊溶液 1 min，然后进行离心。将所得上清液倒 入洁净的分散管中，该分散管依次用 5 mL 乙腈清洗两次。然后将 流过的溶液与清洗溶液混合，并使用旋转蒸发器在 40 °C 下将其蒸 干。最后，将残渣依次溶解于 1.5 mL 甲醇和 1.0 mL 水中。将所得 到的溶液通过 0.22 µm 滤膜，以便采用 UHPLC-MS/MS 进一步 分析。

结果与讨论 UHPLC-MS/MS 条件的优化 首先将标准化合物进样至质谱仪以确定 MS 采集参数，见表 2。 将真菌毒素分为两组，一组在正离子化模式下进行分析，另一组 在负离子化模式下进行分析。如图 1 所示，在优化的 UHPLC 条件下，分别在正离子化模式和负离子化模式下进行分析的两组真 菌毒素均得到了*的基线分离。这一分离结果避免了分析物的 相互干扰，并且还降低了基质本身的干扰效应。与必须采用折中 的 HPLC 条件（流动相、梯度曲线）的极性切换方法相比，将真 菌毒素分为正离子化和负离子化两组单独进行分析能够使这 26 种 真菌毒素获得更高的灵敏度。