采用三重四极杆液质联用系统对畜禽产品中兽药多残留进 行分析

摘要 本文采用安捷伦三重四极杆液质联用系统，建立了同时检测畜禽产品中 52 种兽 药（包括磺胺、喹诺酮、大环内酯、激素和林可胺类等）的分析方法。此方法 使用配有 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱（薄壳型反相 C18 填料）的 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统进行分离，使用配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源 和 iFunnel 离子传输聚焦技术的 Agilent 6495 三重四极杆液质联用系统在正离子模 式下进行监测。该方法在 1-100 ng/mL 浓度范围内线性关系性良好，相关系数 R2 ≥ 0.990；在添加浓度为 1 µg/kg 时，各化合物峰面积稳定性在 0.5%-11.9% 之间； 定量下限可达到 0.1 µg/kg-2.0 µg/kg。通过对方法灵敏度、精密度和线性范围等 方法学参数进行考察，表明所建立的方法能在 20 min 内对畜禽产品中的 52 种兽 药类目标化合物完成快速、高灵敏度的检测分析，*法规监测要求。

前言 兽药残留是指食用动物在应用兽药（包括药物添加剂）后，蓄积或储存在动物 细胞、组织、器官内，或进入动物乳汁及家禽蛋中的药物原型及其有毒理学 意义的代谢物和药物杂质的统称[1,2]。近年来，随着兽药种类的快速增加，使 用范围的快速扩大，以及消费者对食品安全问题及自身健康的日益关注，动 物源性食品中兽药残留问题已成为国内外学者广泛关注的热点。由于兽药残 留种类繁多、理化性质各异、样品中残留水平低，其分析过程具有形式多样 （游离态/结合态）、基质复杂、干扰物质多（包括蛋白、脂质等）等特点，这些 特点也成为兽药残留分析的技术难点。目前，动物源性食品中兽药残留分析的主要技术手段之一 是采用灵敏度高、特异性好的 LC/MS 技术，前处理方式 多按药物性质和类别分类进行提取和净化。近年来，随着 技术手段的不断进步，LC/QQQ 技术在多兽药残留分析方 面的应用取得了长足的进步。在样品处理方面，除了传统 的固相萃取技术外，基质分散 (QuEChERS)、在线柱切换 等技术的应用也大大提高了药物提取净化所覆盖的种类和 范围[3-6]。 本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统/6495 三重四极 杆液质联用系统，建立了同时快速检测畜禽产品中常见的 52 种兽药的可靠定量方法。该方法可以满足对畜禽动物组 织中常见多种兽药残留的高通量快速监测。

实验部分 试剂与化学品 所有试剂和溶剂均为色谱纯或者分析纯级。甲醇和乙腈购 自德国默克 (MERCK)。甲酸和乙酸铵购自美国 Sigma-Aldrich 公司。所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备 的高纯去离子水。混合标准品 (10 µg/mL) 由烟台杰科检测 服务有限公司提供。 仪器 实验采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统进行分离，其由 下列部件组成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 标准自动进样器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自动进样器冷却器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C) 采用配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源和 iFunnel 离子 传输聚焦技术的 Agilent 6495 三重四极杆液质联用系统，在 正离子模式下进行检测。 采用 Agilent MassHunter 工作站软件（B.07 版本）进行数据 采集和分析。 标准溶液配置 使用时用乙腈:水 (10:90) 混合溶剂对混合标准品进行适当的 逐级稀释，从而得到浓度分别为 1、5、10、20、50 ng/mL 的混合标准溶液，临用新制。样品前处理 畜禽产品的样品前处理过程可参照《QuEChERS-超高效液相 色谱-串联质谱法同时检测猪肉中 121 种兽药》[7] 和《采用 LC/MS/MS 结合改进的 QuEChERS 方法对动物源食品中的 36 种兽药进行筛查》[8] 文中所述方法。

液相色谱条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18， 3.0 x 100 mm, 2.7 µm 柱温： 40 °C 进样量： 2 µL 自动进样器温度： 10 °C 流动相： A) 含 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸铵的 水溶液 B) 乙腈 流速： 0.4 mL/min 梯度程序： 时间 B% 0.0 5 1.0 5 6.0 20 10.0 40 15.0 98 17.5 98 停止时间： 18.0 min 后运行时间： 3.0 min 质谱条件 离子模式： 正离子 干燥气温度： 200 °C 干燥气流量： 16 L/min 鞘气温度： 350 °C 鞘气流量： 11 L/min 雾化器压力： 35 psi 毛细管电压： 3000 V 喷嘴电压： 0 V ∆ EMV： 300 V MS1 和 MS2 分辨率： 单位分辨率 MRM 参数： 如表 1 所示

结果与讨论 如图 1 所示，采用配有 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱（薄壳 型填料，3.0 x 100 mm，2.7 um）的安捷伦三重四极杆液质 联用系统，可在 20 min 内对 1 ng/mL 混合标准溶液中 52 种 兽药进行有效分离，且分离效果及峰形均能满足方法要 求。Poroshell 120 EC-C18 色谱柱具有较高柱效、较低柱 压和较高载样量等特点，非常适合分析畜禽样品基质中 的多药物残留。流动相中添加了 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸铵，可以有效促进正模式下的离子化效率。 通过 S/N ≥ 10，计算得到 52 种兽药的定量下限均在 0.1- 2.0 µg/kg 之间，*动物源性食品中多兽药残留的限 量检测要求。6495 三重四极杆液质联用系统可充分满足兽药多残留检测 的要求，如表 1 所示为各兽药的 MRM 参数列表，其中给出 了碎裂电压参考值。6495 的新型预四极杆离子传输聚焦技 术、弯曲锥形碰撞池、以及高能电子倍增管检测器设计， 可以大大提高离子的聚焦传输，产生更有效的离子碎片和 更高的离子/电子转化率，从而大大提高了检测灵敏度、稳 定性及抗污染能力。 采用本文所述方法在浓度范围 1 -100 ng/mL 内对 52 种兽药 的线性相关性进行讨论。结果表明，所有化合物在此浓度 范围内具有良好的线性相关性，相关系数 R2 均大于 0.990， 分别以奥喹多司、氯吡多、诺氟沙星、磺胺对甲氧嘧啶、 泼尼松龙和泰洛星为例，如图 2 所示。

在鸡肉基质提取液中添加 1 µg/kg 浓度的混合标准溶液，连 续进样 10 针，进行方法稳定性讨论。如图 3 所示，在低浓 度添加水平下，52 种兽药的峰面积 RSD 值均在 0.5%-11.9% 之间，*测试的稳定性要求。

结论 本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统/6495 三重四极杆液质联用系统成功实现了对畜禽产品中 52 种多兽药残留 的高灵敏度、快速、稳定的定量分析。本方法各项参数完 全满足动物源性食品中多兽药残留的*检测要求和快速 检测。