三重四极杆液质联用仪对鸡肉中抗病毒类药物金刚烷胺和利巴韦林进行分析

摘要：本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统/6460 三重四极杆液质联用系统建立 了同时检测抗病du药物金刚烷胺 (Amantadine) 和利巴韦林 (Ribavirin)的分析方 法。鸡肉样品经提取金刚烷胺和利巴韦林后，分别采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱净化，采用薄壳型填料反相 C18 色谱柱 — Agilent Poroshell 120 SB-Aq 色谱柱分离，经配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源的安捷伦三重四极 杆液质联用系统在正离子模式下监测。该方法在 0.1-50 ng/mL 浓度范围内线性相 关性良好，相关系数 R2 ≥ 0.999；利巴韦林的添加回收率在 80%-101%、金刚烷胺 的添加回收率在 71%-79%。通过对方法灵敏度、精密度和线性范围等方法学参 数进行考察，得到所建立的方法能在 12 min 内对 2 种抗病du药物金刚烷胺和利 巴韦林完成快速、高灵敏度的检测分析，*法规监测要求。

前言：2013 年底央视曝光山东等地部分养殖户在肉鸡饲养过程中大量滥用抗生素、激 素和抗病毒类药物，违规喂食金刚烷胺、利巴韦林等抗病du药品的“速成鸡” 流入上海百盛旗下餐饮机构一事。美国快餐业*肯德基和麦当劳在中国被卷 入“速成鸡”风波，引发上海人士和全国消费者的广泛关注和担忧！农业部对 此事件高度重视，及时责成山东有关部门去调查处理这件事情，也派出了专家 组奔赴山东。以往文献报道采用 LC/QQQ 分析血浆中利巴韦林或动物源食品中金 刚烷胺[1-3]，但没有此次事件中被曝光的抗病毒类药物利巴韦林和金刚烷胺同时 检测的国家标准和方法，这为相关政府执法检测部门、生产企业和第三方实验 室迅速开展监督检查带来了技术上的困难。

安捷伦科技作为分析仪器业界品牌，多年来一直致力 于为食品安全领域提供强有力的产品、技术、解决方案。 为应对此次食品安全突发事件，安捷伦科技为广大分析工 作者提供了分析检测鸡肉中抗病毒类药物利巴韦林和金刚 烷胺的完整解决方案。

实验部分 试剂、化学品与消耗品 所有试剂和溶剂均为色谱纯级或者分析纯级。甲醇、乙 腈和异丙醇购自德国默克 (MERCK)。甲酸、乙酸铵、三lv乙酸和氨水购自美国 Sigma-Aldrich 公司。所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水。金刚烷胺 和利巴韦林标准品由北京出入境检验检疫局技术中心提供。 所有标准品用甲醇配制为 1 mg/mL 储备液，储存在 -20 °C 冰 箱内（有效期 1 年左右）。用乙腈:水 (50:50) 配制混合工作液 (10 µg/mL)，储存在 4 °C 下（有效期半个月左右）。使用时 用水对混合工作液进行适当逐级稀释后使用，现配现用。 实验采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱对样品提 取液进行净化。

仪器配置 实验采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统进行分离，其由 下列部件组成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 标准自动进样器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自动进样器冷却器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C) 采用配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源的 Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统，在正离子模式下进行检测。 采用 Agilent MassHunter 工作站软件（B.07 或以上版本）进 行数据采集、定性和定量分析。 样品前处理 称取 2 g 鸡肉样品（精确至 0.01 g）至 15 mL 离心管中，依次 加入已知浓度的混合工作液、5 mL 的甲醇:1% 三氯yi酸水溶 液（50:50，V/V），涡旋 30 s，超声 30 min，5000 r/min 离心 10 min，上清液全部转移至 15 mL 离心管中；再加入 5 mL 的 甲醇:1% 三氯yi酸（50:50，V/V）重复提取一次，合并全部 提取液；涡旋均匀后重新离心，取出 5 mL 上清液，过 PCX 和 PBA 固相萃取柱进行净化，流程图如图 1 所示。

结果与讨论 本文采用含有薄壳型填料颗粒的 Poroshell 120 SB-Aq 色谱 柱对利巴韦林和金刚烷胺进行了有效的色谱分离。流动相 中添加 0.1% 甲酸和 5 mmol/L 乙酸铵可以促进正模式下的 离子化效率。根据利巴韦林和金刚烷胺的结构，实验可以 采用电喷雾离子源正离子模式测试。实验结果表明，利巴 韦林可以生成 [M+H]+ (m/z 245.1) 和 [M+Na]+ (m/z 267.1) 分 子离子峰，金刚烷胺可以生成 [M+H]+ (m/z 152.2) 分子离子 峰；分别选择 [M+H]+ 峰进行子离子扫描，最终确认利巴韦 林选择 m/z 113（定量子离子）和 96（定性子离子）、金刚 烷胺选择 m/z 135（定量子离子）和 93（定性子离子）作为 多反应通道监测离子对，所得 MRM 谱图如图 2 所示。 在鸡肉样品基质中含有对利巴韦林色谱峰有干扰的物质， 影响结果测定。实验发现采用 SB-Aq 类型柱填料的色谱柱 在 100% 水相流动相条件下起始，可以实现干扰物与利巴韦 林的基线分离，避免定性定量的干扰，如图 3 所示。实验 发现采用 PCX 固相萃取柱对金刚烷胺净化时，洗脱液中必 须添加 25% 以上的异丙醇才能解吸下来。

结论 采用 1290 Infinity 液相色谱系统/6460 三重四极杆液质联用系统成功的实现了对鸡肉中抗病毒类药物金刚烷胺和利巴 韦林残留量的高灵敏、快速的确证定量分析。本方法采用 Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱有效的实现了样品的净化。 本文所述完整的解决方案可以满足对鸡肉制品中抗病物的快速监督和监测。