HLB-UPLC-MS/MS测定动物源性食品中替米考星残留

摘要：本实验是使用Oasis® PRiME HLB处理动物源性样品基质，建立了动物肌肉样 品中168种兽药残留同时检测的方法。样品经酸化乙腈溶液提取，利用Oasis® PRiME HLB固相萃取小柱通过式净化处理除去磷脂，UPLC-MS/MS检测。在经 过前处理方法与仪器条件优化后，添加浓度为0.5~10 µg/kg的范围内时，磺胺、 喹诺酮、氯霉素、β-受体激动剂、四环素、糖皮质激素、大环内酯、硝基咪唑、苯 并咪唑、内酰胺、金刚烷胺、头孢、性激素、镇静剂、阿维菌素、孔雀石绿、喹乙 醇、玉米赤霉醇、抗菌剂、抗球虫剂、杀虫剂、非甾体类抗炎药、氨苯砜等23类， 共168种药物回收率在20%-120%，精密度RSD<20%(n=5)。

前言：兽药被广泛的应用于治疗或预防动物疾病。动物在使用兽药后，在细 胞、组织或器官内蓄积或储存药物原型、有毒性的代谢物或杂质，形成兽药残留 (Veterinary drug residue)。我国在畜牧养殖方面使用较多的兽药主要有磺胺 类、喹诺酮类、β-受体激动剂类、糖皮质激素类、氯霉素类、头孢类等化合物。 滥用兽药易造成畜牧产品及环境的严重污染，并通过代谢途径进入畜禽产品中， 最终被人体摄入并蓄积，导致过敏反应且使人体产生抗药性等副作用。因此，监 测多种兽药在猪肉为代表的肉制品中的残留对保证肉制品的安全具有积极意义。 目前，相关标准和文献报道的多兽药残留的同时检测方法大多按照兽药种类分 成若干种检测方法，对于日益增长的检测量而言需要耗费大量的人力物力，因此 亟需一个统一简便的多残留检测方案。 此创新的填料能够有效的将样品基质中的蛋白、磷脂等干扰杂质去除干净。采 用Waters UPLC/Xevo® TQ-XS系统，结合QuanpediaTM数据库，建立稳定高效 的多兽药残留液相色谱串联四极杆分析方法，获得准确分析结果。

仪器，试剂与材料 Waters ACQUITY UPLC® I-Class FTN，Waters Xevo TQ-XS三重四极杆质谱，纯水机，Milli-Q，台式高速离心机，旋涡振荡仪，移液 枪，乙腈，Oasis PRiME HLB固相萃取柱(200 mg，6 CC) 样品前处理 称取2.5 g均质好的肉样，加入80%乙腈水溶液(含0.2 %甲酸)10 mL，旋涡振荡，4000 r/min高速离心5min，取上清液待净化。 取Oasis PRiME HLB固相萃取柱，无需活化与平衡，将3 mL上清液 过固相萃取柱，保持一秒一滴的流速，收集全部流出液，然后再准 确量取2 mL流出液，氮气下吹干，1 mL 初始流动相定容，过GHP滤 膜，待上机测试。

流速： 0.45 mL/min 柱温： 45 ˚C 样品温度： 10 ˚C 进样量： 2 µL 质谱条件 离子源： ESI+/ ESI采集方式： MRM 毛细管电压： 3.5 kV 离子源温度： 150 ˚C 脱溶剂气温度： 600 ˚C 脱溶剂气流速度： 1000 L/h 锥孔气： 150 L/h 碰撞其流速： 0.15 mL/min

结果与讨论 样品处理的优化 应用中使用甲酸酸化的乙腈溶液提取目标化合物，同时沉淀蛋白。 由于过高的甲酸添加量会对磺胺类等化合物回收率有影响，故本试 验中选取添加0.2%的甲酸于提取液中，且经比较，0.2%甲酸乙腈 溶液能提高喹诺酮类等30多种化合物的回收率。 大量存在于动物源性样品中的磷脂，干扰部分化合物分析定量，影 响色谱柱寿命及仪器维护成本。利用Oasis PRiME HLB固相萃取小 柱净化样品，能有效去除磷脂等干扰杂质。同时，采用通过式净化 策略能极大提高样品分析通量，并且经过特殊设计的Oasis PRiME HLB流速更快且不容易被堵，也极大的提高了效率。仪器方法的优化 本实验室UPLC-MS/MS方法的建立过程使用Waters Quanpedia 数据库，库中包含了1000多种化合物的LC-MS/MS方法，涵盖了几 乎所有食品检测要求的兽药种类。Waters Quanpedia数据库操作 简便，是包含了从液相条件、采集方法到定量处理方法的完整方法 包，能大大节约方法开发时间，避免实验室间方法开发的差异。

方法回收率和精密度 采用在空白样品中添加标准溶液的方法进行添加回收率测定。分别 添加0.5 µg/kg、1.0 µg/kg、2.0 µg/kg、10 µg/kg 4个浓度水平，按 所建立的方法进行样品处理及测定，每个浓度水平进行3次重复测 定。方法采用空白基质标准曲线，外标法定量。各添加水平的回收 率分布如右图。

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结论 ■ 实验成功建立了同时测定23大类共168种兽药残留的分析方法。分析结果满足动物源性食品中兽药残留 检测的相关要求。 ■ Oasis PRiME HLB固相萃取柱简单的通过式净化处理能有效去除样品中磷脂等干扰物，且处理过程简单 高效，适用于大批量日常分析检测。 ■ Waters Quanpedia数据库包含多兽药残留分析所需的LC-MS/MS方法，能节约方法开发成本，避免实验 室间方法差异。