安捷伦 GC/MS/MS仪器分析成品药和原料药中的五种亚硝胺杂质

摘要：本应用简报重点介绍了一种将 Agilent 7890B 或 8890 GC 与 Angilent 7010B 三重四极杆 GC/MS 系统联用，测定并估算沙坦类成品药和原料药中 5 种痕量亚硝胺杂质 （NDMA、NDEA、NEIPA、NDIPA 和 NDBA）的全面解决方案。7010B 三重四极杆 GC/MS 配备高效离子源 (HES)，可提供出色的灵敏度、重现性和精密度，性能远超 法规限值的要求。该方法可达到的定量限 (LOQs) 仅为当前法规要求的 1/20–1/2。

前言：从 2018 年 7 月开始，FDA 宣布召回缬沙 坦，因为这种药物中含有 N-亚硝基二甲 胺 (NDMA)。对所有制造商的血管紧张素 受体阻滞剂 (ARB) 类活性药物成分 (API) 和成品药的后续调查也导致了缬沙坦、厄 贝沙坦和氯沙坦被额外召回。已发现这 些药品中含有 NDMA 和 N-亚硝基二乙胺 (NDEA)，两者均为已知动物致癌物和疑 似人类致癌物。 随后，N-亚硝基异丙胺 (NEIPA)、N-亚 硝基二异丙胺 (NDIPA)、N-亚硝基二丁 胺 (NDBA) 和 N-亚硝基甲基-4-氨基丁酸 (NMBA) 等其他杂质均被标记为潜在的亚 硝胺杂质。迄今为止，1100 多个不同批 次的沙坦类药物（缬沙坦、氯沙坦和厄贝 沙坦）已被召回，因为其中所含的这些杂 质已超过了临时限值。 FDA 检测与研究办公室 (OTR) 发布了这几 种杂质的几种分析方法，其中新方法使 用单四极杆 GC/MS 与顶空进样分析 4 种 杂质，以及使用三重四极杆 GC/MS/MS 与液体进样分析 5 种杂质。单四极杆 MS 的检测结果常常不准确，且灵敏度较低。 相比之下，GC/MS/MS 更容易在这类情 形下获得特异性，比 GC/MS 方法更合适。我们将 7890B 或 8890 GC 与 7010B GC/MS/MS 联用，使用 OTR 方法进行 分析，发现两种系统对 5 种杂质均表现 出出色的性能。HES 具有更高的电离效 率，产生的离子数量增加了 20 倍，可实 现可靠的痕量分析。8890 GC 由触摸屏界 面而非键盘来控制，可实现诊断测试、系 统监测预警和远程访问。

实验部分 样品前处理 本次分析测试的 APIs 和成品药包括缬沙 坦、奥美沙坦、厄贝沙坦和氯沙坦。准确 称量 500 mg API，加入 15 mL 一次性玻 璃离心管中，并用移液管加入 5 mL 内标 溶液（约 50 ng/mL NDMA:C13-d6 的二氯 甲烷溶液）。某些沙坦类药物（如缬沙坦 和奥美沙坦）*溶于二氯甲烷，而另一 些（例如厄贝沙坦）则形成浑浊溶液或不 可溶。将这些样品涡旋振荡 1 分钟，然后 放入离心机中，以 4000 rpm 的转速离心 2.5 分钟。使用一次性移液器，将约 2 mL 二氯甲烷层通过 0.45 µm 尼龙过滤器过 滤，然后转移至 GC 样品瓶中待分析。标样前处理 适当稀释标样储备液，获得以下浓度的 校准溶液：100、80、40、20、10、5、 2.5 ng/mL，每份溶液均用二氯甲烷配 制，其中含 NDMA:C13-d6 作为内标。 仪器 使用配备 Agilent 7693A 自动液体进样器 的 Agilent 7890B 或 8890 GC 与 Agilent 7010B 三重四极杆 GC/MS 的联用系统进 行分析。气相色谱仪配置 7697A 顶空进 样器，连接到多模式进样口 (MMI)。从进 样口端，将一根尺寸为 30 m × 0.25 mm， 1.0 µm 的 Agilent J&W VF-WAXms 毛细 管气相色谱柱连接到 MS。 表 1 和表 2 显示了 GC 和 MS 参数。

MS 采集方法 使用 OTR 方法中的 MRM 采集数据。 结果与讨论 化合物间达到了足够的分离度，目标峰与 溶剂和基质峰也充分分离。所有 5 种化 合物的保留时间均与 FDA 法规中所提供 的数据保持一致（图 1 和图 2）。 使用线性拟合绘制校准曲线。FDA 要求相 关系数 (R2 ) ≥ 0.998。本研究的所有 5 种 杂质均获得了出色的线性，R2 > 0.999， 如图 3A (7890B GC) 和图 3B (8890 GC) 所示。

结论 7890B-7010B 和 8890-7010B GC/MS/MS 联用系统对所有 5 种亚硝胺药物杂质均 表现出相似的出色性能。8890 GC 可实现 诊断测试、系统监测预警以及触摸屏控制 和远程访问。7010B 三重四极杆 GC/MS 的设计包含 HES，与 7890B 和 8890 GC 提供的惰性样品流路结合后，可降低痕量 杂质的检测限。这些特性使系统对所有 5 种残留实现了可靠定量。改进的 LOQs 仅为建议水平的 1/20–1/2，可在不更改 方法参数的前提下进行高灵敏度分析。