使用 （LC/MS/MS） 对动物组织和鸡蛋中的兽药进行多类别残留分析

摘要 ：本应用简报介绍了一种针对不同动物源性食品样品中多类别兽药的筛查和定 量而开发的工作流程解决方案，内容涵盖从样品前处理到结果定量分析。这 些兽药属于 32 个不同的化学类别，包括大环内酯类、磺胺类、四环素类、 β-内酰胺类、β-激动剂类、氯霉素类、硝基咪唑类、头孢烯类、阿维菌素 类、苯并咪唑类、糖皮质激素类、非甾体抗炎药 (NSAID) 类、肽类、抗球虫 药类、喹诺酮类、咪唑类、雄激素类、聚醚类、三苯甲烷类、吩噻嗪类、喹 喔啉类、抗吸虫药类、抗病类、农药类、氨苯砜类、有机酸类、硝基类 化合物、镇静剂类等。动物源性食品样品包括猪、牛和鸡的肌肉和肝脏以及 鱼和鸡蛋。样品前处理包括利用酸化乙腈实现快速高效的蛋白质沉淀和目标 物提取，然后使用 EMR-Lipid 增强型脂质去除净化管（部件号 5982-1010）和 Polish 净化盐析萃取步骤相结合（部件号 5982-0102）进行进一步净化。该工 作流程解决方案支持与安捷伦喷射流离子源结合使用的多种类型的安捷伦串 联质谱仪（Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统、Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统和 Agilent 6495 三重四极杆液质联用系统）。

前言 兽药 (VD) 在兽医业中广泛应用于治疗和预防疾病，或用 于提高生长和饲养效率。如果兽药施用不当，可能导致 供人食用的动物源性食品中存在兽药残留，从而造成健 康风险。在长期暴露下，尽管一些抗微生物剂在食品中 的浓度非常低，也可能导致人群耐药性的提高。 为更好地控制兽药的使用并保护公众健康，国家监管机 构对肉类及其他食品中的兽药残留*进行了监管。 中国农业部 (MOA) 发布的第 235 号公告中将兽药分为 四类：I 类药物允许使用，且没有规定大残留* (MRL)。II 类药物允许用于治疗疾病，需要遵守 MRL 规 定。III 类药物允许用于治疗疾病，但是在人类食用的样 品中不得检出。IV 类药物禁止使用，不允许在样品中检 出。中国政府每年都会制定一系列用于控制 II、III 和 IV 类兽药使用的监测计划。当前，中国发布的兽药残留分 析标准方法重点针对仅一种化学类别或几种化学类别的 药物（如磺胺类、喹诺酮类、四环素类等）。可能需要 数天时间才可完成终检测并得到报告。此类工作流程 不仅耗时、费力且成本高，而且在处理大量样品时效率 很低。我们的工作流程解决方案旨在使实验室能够同时 分析多种化学类别的 180 多种经常监测的 VD。该方法中 的兽药清单基于第 235 号公告（中国农业部）。 动物源性食品样品包含大量蛋白质和脂类，为样品前处 理带来了严峻挑战。在本研究中，选择酸化乙腈（5% 甲酸）作为萃取溶剂，能够实现高效的蛋白质沉淀，将 分析物萃取到有机相中。利用 Agilent Bond Elut EMR-Lipid 增强型脂质去除净化管 (EMR-Lipid) 与 Polish 净化盐析萃 取步骤相结合进行净化。EMR-Lipid 增强型脂质去除产品 是一种新型吸附材料，能够选择性去除样品中的主要脂 类且不影响分析物回收率。

实验部分 标准品与试剂 兽药标准品购自 Dr. Ehrenstorfer GmbH、WITEGA laboratorien Berlin-Adlershof GmbH、Toronto Research Chemicals (TRC) 或 AccuStandard 公司。在流动相配制中使用超纯水 （> 18.2 MΩ，ELGA VEOLIA PureLab Chrous 系统）、乙腈 （LC/MS 级，Fluka）和甲酸（~98%，质谱用，Fluka）。 在样品前处理中使用乙腈（ACN，HPLC 级，SigmaAldrich）、二甲基亚砜（DMSO，> 99.9%，Aldrich）、乙酸 铵（≥ 98%，Sigma-Aldrich）和甲酸（~98%，HPLC 级， Fluka）。 样品前处理 开发出一种快速简单的样品前处理方法。使用酸化乙腈 萃取均质样品，还用作蛋白质沉淀步骤。采用 Agilent EMR-Lipid 增强型脂质去除产品选择性去除脂类而不吸附 目标化合物，然后通过终 Polish 净化盐析萃取步骤进 行净化，对萃取物进行进一步净化。 该样品前处理方法适用于许多类型的动物源性食品样 品，包括猪、牛和鸡的肌肉和肝脏以及鱼和鸡蛋。

 仪器 采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统进行分析，其中 包括： • 多兽残解决方案包 (G6413AA) • Agilent 1290 Infinity II 二元泵 (G7120A)，配备 35 µL Jet Weaver • Agilent 1290 Multisampler (G7167B)，配备 20 µL 定量环 • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温箱 (G7116B) 对三种型号的串联质谱仪进行了测试： • 采用喷射流技术的 Agilent 6460 三重四极杆液质联用 系统 (G6460CA) • 采用喷射流技术的 Agilent 6470 三重四极杆液质联用 系统 (G6470AA) • 采用 iFunnel 和喷射流技术的 Agilent 6495 三重四极杆 液质联用系统 (G6495A)

方法开发与验证 在方法开发和验证过程中考虑下列性能特性：动态范 围、检测限 (LOD)、定量限 (LOQ)、回收率和重现性。 在 Agilent 6495 三重四极杆液质联用系统上使用五种基 质（猪肉、猪肝、鳗鱼、鸡肉和鸡蛋）在三种加标浓度 （1 ng/g、5 ng/g 和 20 ng/g）下对解决方案进行了全面 验证。在 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统上使用猪肉基质，在三种加标浓度（1 ng/g、5 ng/g 和 20 ng/g） 下对解决方案进行全面验证。在 Agilent 6460 三重四极杆 液质联用系统上使用猪肉和猪肝基质，在三种加标浓度 （1 ng/g、5 ng/g 和 20 ng/g）下对解决方案进行全面 验证。

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结论 本文介绍了安捷伦开发的主要针对中国用户的多兽药残 留分析工作流程解决方案，用于筛查和定量分析不同动 物源性样品中的多兽药残留。该解决方案支持安捷伦多 种液相色谱系统和带喷射流技术离子源的串联四级杆质 谱系统的自由搭配。我们已经证明，这套从样品前处理 到结果分析的完整工作流程解决方案可用于分析大多数 类型的动物源性食品样品，具有高灵敏度以及良好的准 确度和精密度。该工作流程解决方案能够通过一种方法 分析涵盖 32 种不同类别的 180 多种兽药，有助于显著提 高样品通量，且不损失数据质量、稳定性和灵敏度。