使用Ultivo三重四极杆液质分析测定人血清中的睾酮

前言：本研究开发出一种使用微型 Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 定量分析血清中游离睾酮的稳定、灵敏且相对快速的分析方法。Ultivo 设计用于解决常规分析实验室所面临的许多挑战。本研究的目的在于评估这种新型三重四极杆质谱仪 (MS) 如何用于分析受研究关注的典型内源性分析物1 。Ultivo 采用的创新技术使安捷伦能够减小仪器体积，同时达到与类似大型质谱系统相当的分析性能水平。VacShield 真空盾、 Cyclone Ion Guide 气旋离子导杆、十二极杆 Vortex Collision Cell 涡旋碰撞室和小型双曲面四极杆等仪器创新旨在大程度提高微型仪器的定量分析性能，并提高仪器可靠性和稳定性。 Ultivo 减少了用户对系统维护的干预，使非专业质谱用户能够从容应对系统运行和维护。Agilent MassHunter 软件简化了数据采集、方法设置、数据分析和报告，获得了从采集到报告的短时间，提高了实验室分析效率。本研究概述了使用 Ultivo 三重四极杆 LC/MS 得到的人血清中游离睾酮的典型确认性能，概述了定量下限、色谱精度、校准线性、范围和准确度。

化学品与试剂用于基质匹配校准品的人血清购自 Golden West Biologicals (Temecula, CA)。标准品和内标购自 Cerilliant Corporation (Round Rock, TX)。样品前处理和液相色谱溶剂购自 SigmaAldrich (St. Louis, MO) 和 Honeywell Riedel-de Haën (Seelze, Germany)。

样品前处理通过在阴性人血清中加标睾酮获得高浓度样品，然后通过用洁净血清连续稀释制得低浓度样品。使用 500 µL 乙腈通过蛋白质沉淀对 250 µL 各种样品进行提取。将样品涡旋混合 1 分钟，然后以 10000 rpm 的转速离心 4 分钟。在引入液相色谱系统中之前，用 500 µL 水对 500 µL 上清液进行稀释。制备浓度范围为 0.001–100 ng/mL 的 11 点校准曲线标样，重复三次。将足量的内标储备液直接加入每种基质标样和校准品中，使进样分析的所有类型样品均获得 25 ng/mL 的一致浓度。数据分析采集数据并用 Agilent MassHunter 软件包 C.01.00 版对 Ultivo 采集的数据进行分析。利用 Agilent MassHunter Acquisition Optimizer 软件获得 MS/MS 离子对，以确定母离子和子离子、碎裂电压和碰撞能量。进样各种化合物或内标的纯溶液（浓度为 1000 ng/mL，在流动注射模式下进样量为 2 µL）后，即完成分析步骤。

结果与讨论：线性睾酮分析物的校准浓度范围为 1 pg/mL 至 100 ng/mL。利用 1/x 的加权因子得到睾酮化合物在整个浓度范围内表现出线性效应，在 n = 3 的条件下，R2 值高于 0.999。由三批样品得到的精度数据表明，在所有校准浓度下，%RSD 变化小于 5%。

结论：本研究项目表明，Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 能够在 6 分钟的分析周期内使人血清中浓度在 1 pg/mL 至 100 ng/mL 范围内的游离睾酮分析得到优异的线性、精度和分析灵敏度。未来的工作中，需要评估不同供应商来源的血清和血液基质对这种分析方法的潜在干扰，以及通过更多样品前处理技术配制 LC/MS 分析样品的影响。