针测定植物性食品中208种农残及代谢物

前言：中国是农药生产和使用大国，农药广泛用于农业生产中，同时农药滥用和不规范使用现象比较普遍，所以在食品中农药残留情况也是比较突出。日常检测中，农残检测的任务也相当繁重，当前我国对于农残检测的方法标准主要集中在GC、GCMS等，随着气相色谱三重四极杆质谱的普及，GC-MS/MS 的检测方法以其高选择性、高灵敏度、高通量特点越来越受检测工作者的欢迎，为此农业部在2017年发布了《食品安家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》（征求意见稿）。赛默飞应用团队基于此国标方法，开发了应对不同基质中农残前处理方式，以及配套的仪器方法和数据处理方法，以满足农残检测快速、准确、高通量的要求。基于QuEChERS前处理技术，我们开发了上海青、大米、花生油、茶叶四种具有代表性的样品基质的提取净化方法，基于TSQ 9000的Time-SRM扫描方式建立了一针检测208种农药的仪器方法(Instrument Method)，依托 TraceFinder软件开发了对应的数据处理方法(Master Method)。对样品基质进行了不同浓度的加标回收测算，经过基质标准曲线定量计算，大部分的化合物回收率在80-120%之间，基质标准曲线浓度在0.01-0.2 mg/kg范围内，所有化合物的线性相关系数均在0.99以上，定量限都能做到0.01 mg/kg。

2. 仪器气相色谱-三重四极杆质谱仪TSQ 9000 (赛默飞世尔科技，美国)，Pesticides II 30 m×0.25 mm×0.25 µm with 5 m guard（PN：26RD142F）毛细管色谱柱。

3. 主要试剂和材料 3.1 乙腈（色谱纯） 3.2 正己烷（色谱纯） 3.3 冰醋酸（分析纯） 3.4 酸化乙腈（1:99）：取10 mL冰醋酸（3.3）加入到 990 mL乙腈（3.1）中，混匀 3.5 正己烷饱和的乙腈：取500 mL乙腈（3.1），往里加入正己烷（3.2），直到有明显分层 3.6 QuEChERS盐包1（PN：60105-333-P）：含4 g硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠 3.7 QuEChERS盐包2（PN：60105-335-P）：含6 g无水硫酸镁、1.5 g醋酸钠 3.8 QuEChERS净化管1（PN:60105-218-P）：内含 900 mg硫酸镁、150 mg PSA及15 mg GCB的15 mL 塑料离心管 3.9 QuEChERS净化管2（PN：60105-226）：内含 1200 mg硫酸镁、400 mg PSA、400 mg C18及400 mg GCB 的15 mL塑料离心管 3.10 QuEChERS净化管3（PN：60105-225-P）：内含 1200 mg硫酸镁、400 mg PSA及400 mg C18的15 mL 塑料离心管

4 实验部分 4.1 QuEChERS前处理方法根据不同的样品基质类型，前处理有如下四种基本流程： 4.1.1 上海青（适用于蔬菜、水果和食用菌类）称取10 g已均质好的试样（0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加入10mL乙腈（3.1），充分混匀后，放入-20℃冰箱冷冻10 min，再加入4 g硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠等盐包（PN：60105-333-P），盖上离心管盖，剧烈震荡1 min 后，9000 r/min离心6 min。吸取6 mL上清液到内含900 mg 硫酸镁、150 mg PSA及15 mg GCB的15 mL塑料离心管中（PN: 60105-218-P）,涡旋混匀1 min, 9000 r/min离心 6 min，吸取1 mL上清液于进样瓶中，待上机测定。

4.1.2 大米（适用于谷物、油料和坚果类）称取5 g已粉碎的试样（0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置30 min。加入10 mL 1%醋酸乙腈溶液（3.4），充分混匀后，放入-20℃冰箱冷冻10 min，再加入6 g无水硫酸镁、1.5 g醋酸钠等盐包（PN：60105-335-P），盖上离心管盖，剧烈震荡1 min后 9000 r/min离心6 min。吸取6 mL上清液加到内含1200 mg 硫酸镁、400 mg PSA及400 mg C18的15 mL塑料离心管中（PN：60105-225-P），涡旋混匀1 min。9000 r/min离心 6 min，吸取1 mL上清液于进样瓶中，待上机测定。 4.1.3 普洱茶（适用于茶叶和香辛料类）称取2 g已粉碎的试样（0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置30 min。加入10 mL 1%醋酸乙腈溶液（3.4），充分混匀后，放入-20℃冰箱冷冻10 min，再加入6 g无水硫酸镁、1.5 g醋酸钠等盐包（PN：60105-335-P），盖上离心管盖，剧烈震荡 1 min后9000 r/min离心6 min。吸取6 mL上清液加到内含 1200 mg硫酸镁、400 mg PSA、400 mg C18及400 mg GCB的15 mL塑料离心管中（PN：60105-226），涡旋混匀1 min。9000 r/min离心6 min，吸取1 mL上清液于进样瓶中，待上机测定。 4.1.4 花生油（适用于食用油类）称取2 g试样（0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加入10 mL正己烷饱和的乙腈（3.5），剧烈震荡1 min后 9000 r/min离心6 min。吸取乙腈层加到内含1200 mg硫酸镁、400 mg PSA及400 mg C18的15 mL塑料离心管中（PN：60105-225-P），涡旋混匀1 min。9000 r/min离心 6 min，吸取1 mL上清液于进样瓶中，待上机测定。

4.2. 样品基质溶液：选取空白样品，用（4.1）前处理方式得到的空白基质溶液。

4.3. 标准溶液的配置 7.1 标准储备液：在十万分之一分析天平上称取每种农药单标化合物10 mg，加入10 mL相应的溶剂（根据不同的化合物加入丙酮、甲苯或者乙腈）溶解，配制成浓度为约1000 mg/L 的溶液。每种单个标准储备液的浓度根据称样量和加入溶剂的体积计算得到。所有单标储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。单标储备液的有效期为6 个月。 7.2 混合标准中间液：移取适量的单标储备液，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0 mg/mL。中间标准储备液在-20 ℃冰箱中冷冻保存。中间储备液的有效期为3 个月。 7.3 工作标准溶液：取适量的混合标准中间液，以空白样品基质液（6）依次稀释成浓度为0.010, 0.020, 0.050, 0.100, 0.200 mg/L的工作标准溶液。

4.4 仪器方法 4.4.1气相方法：柱温箱：40 ℃保持1.5 min，以25 ℃/min升至90 ℃，保持1.5 min，再以25 ℃/min升至180 ℃，保持1.5 min，以 5 ℃/min升至 280 ℃，后以 10 ℃ /min 升温到 300 ℃，保持 5 min；SSL进样口：温度270 ℃，进样模式：不分流进样，不分流时间：1 min；载气：恒流，1.2 mL/min. 4.4.2质谱方法：传输线温度：280 ℃；离子源温度为300 ℃；离子源：E I；采集方式：Time-SRM；分辨率：F W H M 0.7Da(Q1和Q3)；化合物离子对信息来源于Thermo农残数据库CDB以及AutoSRM。 4.5 数据处理使用 Thermo Scientific™ TraceFinder软件对数据进行采集、处理和报告分析，该软件可同时实现仪器控制、方法开发、定量/ 定性分析以及报告编辑。此外，TraceFinder 软件可以根据你所需要的信息自定义报告模板。