在UPLC-MS对肉中兽药多残留分析之前采用HLB小柱进行有效净化

目的：展示在UPLC®-MS分析之前采用Oasis® PRiME HLB小柱净化肉类提取物的效率。

背景：沃特世(Waters®)为肉中兽药多残留沃特世液质联用仪LC-MS/ MS筛查开发了优化的样品前处理和分析方案。典型肉类样品的主要成分是水(高达 70%)、蛋白质(15-25%)、脂肪(5-25%)和磷脂(1-3%)。在提取过程中，蛋白质可以通过沉淀和离心去除。然而，大量脂肪和磷脂会随着目标物化合物一起提取出来。这些共提取物质的存在可能会干扰LC-MS分析，污染 UPLC系统的分析柱和其它组件，并且还会污染质谱仪。在过去，分析人员采用繁琐的正己烷脱脂步骤或使用反相吸附剂(如硅胶C18) 从肉类提取物中去除脂肪。虽然这些技术可以有效去除脂肪，但均不能去除磷脂。

脂肪和磷脂对仪器和色谱柱而言是非常棘手的潜在污染物。Oasis PRiME HLB小柱提供了一种在LC-MS分析前对肉类提取物进行快速净化以去除这些物质的方法。

解决方案：使用Oasis PRiME HLB小柱通过式净化可以从肉类提取物中高效地去除脂肪和磷脂。同样重要的是，Oasis PRiME HLB小柱净化不会影响兽药的回收率。该方法的回收率与使用正己烷脱脂法或硅胶C18净化法得到的回收率相当，但使用Oasis PRiME HLB 小柱时的净化效率更高。

实验初步提取。从兽药中选择具有代表性的化合物，称取5 g猪肉样品(含15%脂肪)并匀浆，加入10 mL含0.2%甲酸的乙腈/水(80:20) 进行提取。将样品涡旋混合30秒、振摇30分钟，然后在12000 rpm下离心5分钟。 Oasis PRiME HLB小柱净化。 将Oasis PRiME HLB小柱(3 cc, 60 mg)安装在预先清洁过的真空导管上。无需执行小柱活化步骤。取约0.5 mL的上清液，使其通过Oasis PRiME HLB小柱并收集滤液。进行UPLC-MS/MS分析之前，用10 mM甲酸铵缓冲溶液 (pH 4.5)将收集到的样品稀释3倍。

结果：所有被测化合物在通过式净化步骤中均无损失或损失极少。除保泰松(32%)外，其余被测化合物的回收率(主要通过测量初始液相提取步骤的效率所得)的平均值超过了80%。上述回收率与使用硅胶C18净化方法的结果相当，但硅胶 C18不能去除磷脂。UPLC-MS/MS条件和色谱图如图1所示。图2所示的色谱图展示了Oasis PRiME HLB小柱去除磷脂的效率；它比硅胶C18净化方法多去除了90%以上的磷脂。通过重量分析，我们还测得Oasis PRiME HLB小柱去除了猪肉提取物中90%以上的共提取脂肪。

结论 ■ Oasis PRiME HLB小柱在使用前不需要活化或平衡；其简单的一步式SPE净化非常有效。 ■ Oasis PRiME HLB小柱去除了猪肉样品的乙腈提取物中 90%以上的脂肪和磷脂。 ■ 采用Oasis PRiME HLB小柱通过式的净化不会影响待测化合物的回收率，还能有效去除提取物中的脂肪和磷脂。