使用 Ultivo三重四极杆液质联用系统测定亚硝胺杂质

摘要：新的研究结果表明，某些血管紧张素 II 受体阻滞剂 (ARB) 药物产品含有致癌性亚 硝胺杂质[1]。因此，这类产品有许多被召回，表明行业迫切需要一种常规分析方法， 来检出高于目标浓度的致癌性亚硝胺杂质。本应用简报介绍了基于灵敏的 Agilent Ultivo LC/TQ 的方法工作原理，它不仅适用于美国食品药品监督管理局 (FDA) 列出的 六种亚硝胺，还适用于同时检测六种其他可能致突变的亚硝胺杂质。

召回缬沙坦、氯沙坦和厄贝沙坦等 ARB 药物的宣布使 N-亚硝基杂质成为 FDA 和 欧洲药品管理局 (EMA) 等监管机构关注 的重点。亚硝胺杂质是这些药品生产过程 中产生的痕量副产品。这些杂质被归类 为疑似致癌物（即潜在遗传毒性杂质）。 本应用简报介绍了使用 Ultivo 三重四极杆 液质联用系统进行基于 LC/MS 的分析方 法。在极低检测限下，对 12 种亚硝胺化 合物进行了全面分析。所有亚硝胺杂质的 分子量都很小，从 74 到 158 不等。杂质 化合物包括： • N-亚硝基二jia胺 (NDMA) • N-亚硝基二乙胺 (NDEA) • N-亚硝基-4-甲基-4-氨基丁酸 (NMBA) • N-亚硝基异丙胺 (NEIPA) • N-亚硝基二异丙胺 (NDIPA) • N-亚硝基二丁胺 (NDBA) • N-亚硝基甲乙胺 (NMEA) • N-亚硝基吡咯烷 (NPyR) • N-亚硝基哌啶 (NPIP) • N-甲基-N-亚硝基苯 (NMPhA) • N-异丙甲基亚硝胺 (NMIPA) • N-叔丁基-N-乙基亚硝胺

实验部分：化学品与试剂 本研究使用的 12 种亚硝胺标准品均来 自 PS3 Labs LLP, Hyderabad, TS, India。 LC/MS 分析级溶剂（如甲醇、水）购 自 Honeywell。分析中用到的甲酸购自 Fluka。 数据分析 用 Agilent MassHunter 软件 1.1 版对 Ultivo 采集的数据进行分析。利用 Agilent MassHunter Acquisition Optimizer 软件 获得 MS/MS 离子对并对其进行优化， 在进样分析各种化合物的纯溶液（浓度 为 1000 ng/mL，在流动注射模式下进样 量为 1 µL）时确定佳的母离子、子离 子、碎裂电压和碰撞能量。

结果与讨论：校准浓度范围为 0.05–100 ng/mL，详细 信息汇总于表 4 中。所有分析物的 R2 值 均大于 0.996，在整个浓度范围内表现出 线性响应。图 1 显示了 Ultivo TQ 的代表 性叠加 dMRM 色谱图，展示了所有 12 种 亚硝胺化合物在 10 ng/mL 下的洗脱。

结论：Agilent Ultivo三重四极杆LC/MS液质联用系统可以在监管要求的低浓度水平下分析亚硝胺 杂质。本应用简报表明 Ultivo LC/TQ 在检 测某些低浓度亚硝胺杂质方面的灵敏度。 该方法可用于不同 ARB 药品中杂质的定 量，并可根据药品的洗脱模式改变色谱 条件。