Ultivo三重四极杆液质联用对氯沙坦钾中的 NMBA 进行定量分析

摘要：本文介绍了采用 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统检测氯沙坦钾中的亚硝胺类杂质 N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸 (NMBA) 的方法。该方法采用常规 ESI 源，即可获得满足检测 要求的分析结果，且方法简单、特异性高、灵敏度可达 0.005 ppm，大大优于 FDA公 布的*，非常适用于对氯沙坦钾类产品中的 NMBA 进行快速、准确的定量分析。

前言：2019 年 3 月 1 日，美国食品药品监督管理局 (FDA) 在[1] 发布公告，对用于治疗高血压 和心力衰竭的多种通用血管紧张素 II 受体阻滞剂 (ARB) 药品自愿召回。导致此次召回的主 要原因是发现其中含有 NMBA 杂质，这是在 ARB 药物中检测到的第三种亚硝胺类遗传毒 性杂质。 NMBA 全称 N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸 (N-nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid，CAS 号 61445-55-4），结构如图 1 所示，属于亚硝胺类遗传毒性杂质。根据 FDA 初步评估， NMBA 暴露患者的癌症风险增加似乎与 N-亚硝基二jia胺 (NDMA) 暴露相同，但低于 N-亚硝 基二乙胺 (NDEA) 暴露的风险。FDA 目前给出的 NMBA 可接受*是 96 ng/天，在 ARB 药物中临时限度为 0.96 ppm[1]。

关于氯沙坦钾中 NMBA 的检测，欧洲 OMCL 实验室 2019 年 4 月 公布了 LC-MS/MS（APCI 源）方法[2]，FDA 于同年六月份公布了 LC-HRMS 方法和 RapidFire-MS/MS 方法[3,4]，而 FDA 这两种方法 都不是实验室常规的定量分析平台。 本文采用配置了 ESI 源的 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统 进行 NMBA 检测。该方法操作简单、灵敏度高、特异性高且重现 性好，可有效地应用于氯沙坦钾中 NMBA 的定量分析。

实验部分：试剂和样品 甲醇为质谱级，甲酸为色谱级，购于 Merck；所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水；NMBA 标准 品和样品由合作用户提供。 仪器和设备 采用 Agilent 1290 Infinity II 超高效液相色谱系统与 Ultivo 三重四极杆液质联用系统。液相色谱系统配备如下：二元泵（部件 号 G7120A）、自动进样器（部件号 G7167B）、柱温箱（部件号 G7116B）。 色谱柱选用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18（2.1 × 100 mm, 2.7 μm，部件号 695775-902）。另据用户验证，Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C8（2.1 × 100 mm, 2.7 μm，部件号 695775-906）也可以达到相似的效果。 标准溶液制备 精确称取 NMBA 标准品，加水超声溶解，并定量稀释制成每 1 mL 中含 1 mg 目标化合物的高浓度标准品溶液。用水逐级稀释 成每 1 mL 中分别包含 0.05、0.1、0.5、1、5、10、50、100 ng 目标化合物的溶液，作为标准品线性系列溶液。线性范围和相关 浓度点可根据检测需要自行调整样品前处理 取氯沙坦钾样品约 10 mg，加 1 mL 水，摇匀，超声溶解。

液相色谱条件： 色谱柱： Poroshell 120 EC-C18, 2.1 × 100 mm, 2.7 μm 流速： 0.4 mL/min 柱温： 35 °C 流动相： A) 含 0.1% 甲酸的水溶液 B) 甲醇 梯度程序： 时间 (min) B (%) 0.00 5.00 0.50 5.00 2.50 20.00 3.00 98.00 6.00 98.00 6.10 5.00 7.00 5.00 后运行时间： 1 min

结果与讨论：色谱分离结果 氯沙坦钾原料药体系相对简单，可采用常规反相色谱体系（C18 或 C8 柱）进行分离。初始高比例水相主要用于洗脱钾盐，避免 高浓度盐的离子抑制效应影响回收率。在本研究中所用的色谱条 件下，NMBA 的保留时间约为 2.3 分钟。随后的高比例有机相用 于洗脱氯沙坦。由于氯沙坦浓度很高，为避免污染质谱系统，建 议将流路设置为“引入废液”。 因为受限制的 N-N 键存在顺反结构 (syn and anti conformers)[5]， NMBA 在色谱体系中表现为双峰，本研究中所用的色谱条件可以 实现两种异构体的基线分离（图 2）。不过，在 NMBA 定量分析 中，需要对两个峰积分并合并峰面积[3]。