动物源性食品中wu氯酚残留量的测定-安捷伦三重四级杆液质

摘要：本文参照 GB 23200.92-2016，使用 Agilent Bond Elut PAX 小柱结合高灵敏度 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统开发出一种测定动物源性食品中wu酚残留量的方法。

前言：五lv酚 (pentachlorophenol, PCP) 作为氯代烃类杀虫剂和灭真菌剂，被广泛地用作农业杀 虫剂、除虫剂等。五lv酚不仅具有致畸、致癌、致突变等作用，还具有生物蓄积作用，在 高有机质含量的酸性土壤或沉积物中具有很高的吸附性，可被植物吸收并进入食物链， 终危害人体健康。农业部公告第 235 号规定所有的动物源性食品中禁用五lv酚钠，在动 物源食品中不得检出[1]。 在常规方法中，提取、净化、氮吹等前处理操作会导致回收率偏低、重复性不好；色 谱梯度条件会导致五lv酚附近出现明显基质干扰，使得分析结果不准确。本文参照 GB 23200.92-2016[2]，通过优化各前处理步骤及色谱梯度条件，使五lv酚在肌肉、鸡蛋、虾 和牛奶基质中回收率均大于 80%，且重复性 RSD (n = 3) 小于 5%，结果稳定可靠。

实验部分：试剂和样品 乙腈、甲醇，色谱纯，购于 J&K Scientific；氨水、甲酸、乙酸， 分析纯，购于 J&K Scientific；五lv酚钠标准品，纯度 94.5%，购 于 Dr. Ehrensorfer；样品均为市售产品。

提取：肌肉、鸡蛋、虾等 称取均质试样 2 g，置于 50 mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入 2 mL 水，均质化 1 min，加入 5 mL 5% 氨水乙腈溶液，涡旋混 合 1 min，超声提取 5 min。在 4 °C 下以 9000 r/min 的转速离心 5 min，移取上清液置于另一试管中。离心后的残渣用 5 mL 5% 氨水乙腈溶液重复上述提取步骤 1 次，合并上清液，混匀。待 净化。 提取：牛奶 称取均质试样 2 g，置于 50 mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入 10 mL 5% 氨水乙腈溶液，涡旋混合 1 min，超声提取 5 min。在 4 °C 下以 9000 r/min 的转速离心 5 min，移取上清液置于另一试 管中。待净化。 净化 Agilent Bond Elut Plexa PAX 小柱经 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 将提取步骤得到的上清液全部上样到 Bond Elut Plexa PAX 小柱 上，弃去流出液。依次用 5 mL 5% 氨水溶液、5 mL 甲醇、5 mL 2% 甲酸甲醇-水溶液（由 4% 甲酸甲醇溶液与水等体积混合得 到）进行淋洗。待淋洗液*通过小柱后，弃去流出液，用真空 泵抽干固相萃取柱 2 min。以 3 mL 8% 甲酸甲醇溶液洗脱，抽干 小柱；将洗脱液收集到干净的 15 mL 具刻度试管中，加水定容至 4 mL，混匀。溶液过 Agilent PTFE-Q 针头过滤器后待分析。

色谱条件 系统： Agilent 1290 Infinity II LC 色谱柱： Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (2.1 × 50 mm, 1.8 µm) 流动相 A： 5 mmol/L 乙酸铵溶液 流动相 B： 甲醇 进样量： 20 µL 柱温： 25 °C梯度条件： 时间 (min) B (%) 0.0 40.0 7.0 100.0 7.5 40.0 12.0 40.0

质谱条件 系统： Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统 离子源： ESI干燥气温度： 300 °C 干燥器流速： 5 L/min 雾化器压力： 45 psi 鞘气温度： 250 °C 鞘气流速： 11 L/min 扫描模式： MRM 毛细管电压： 3500 V(-) 喷嘴电压： 500 V(-)

结果与讨论 本文所述方法适用于牛奶、肌肉、鸡蛋和虾中五lv酚残留量的测 定。方法在 0.25–2.5 ng/mL 范围内表现出良好的线性（基质匹配 校准曲线），R2 > 0.99，如图 3–6 所示。

基质效应 ME = K1/K2，K1 为基质匹配校准曲线斜率，K2 为标 准溶液曲线斜率。当 ME 值为 1 时，表示无基质效应；ME 值小 于 1，则基质抑制；ME 值大于 1，则基质增强。通常认为 ME 在 0.8–1.2 范围内，基质效应不显著。通过不同基质的基质效应 ME 的计算，说明 Bond Elut Plexa PAX 对肌肉等基质有较好的净化效果，且基质效应不显著（见表 2）。从图 7–10 的色谱对比图中可以看出，通过对 GB 23200.92- 2016[2] 梯度条件的调整，在猪肉、鸡蛋、虾肉和牛奶基质中，wu 氯酚的出峰位置无基质干扰，可以进行准确的定量分析。 如表 3 所示，五lv酚添加浓度为 1、2、4 μg/kg 时，各种基质的 回收率均在 80% 以上，RSD 均小于 5%。本方法对五lv酚的定量 限为 1 µg/kg。

结论：本文采用 Bond Elut Plexa PAX 小柱结合 HPLC-MS/MS，优化建 立了动物源性食品中五lv酚残留量测定的分析方法。文中采用的 Bond Elut Plexa PAX 小柱采用*的新型羟基化外表面、疏水 性内部结构和高级聚合物骨架，这种高级材料具有单分散粒径分 布，流动特性出色，极少出现柱床堵塞。Agilent PTFE-Q（亲水 PTFE）针头过滤器同时兼容水相和有机溶剂，通过严格的质控保 证，具有极低的溶出，且对五lv酚没有吸附作用。 通过对以上耗材的选用及前处理步骤的优化，该方法五lv酚出峰 附近无明显基质干扰，添加浓度为 1、2、4 μg/kg 时，各种基质 的回收率均在 80% 以上，RSD 均小于 5%，结果稳定可靠。