AB液质联用仪分析酸性农药的实验方法（负离子模式）

色谱流动相的制备： 1M甲酸铵溶液：称取63g甲酸铵，溶于1L HPLC级的水中。 流动相A：在1L水(HPLC级) 中加入5mL 1M甲酸铵溶液。 流动相B：在1L甲醇(HPLC级) 中加入5mL 1M甲酸铵溶液。

样品制备（水果与蔬菜基质） 基于Anastassiadies等人提出的方法[1] ：

1. 称量10g切碎的样品；

2. 加入100µL 内标溶液(D5-Atrazine 1µg/mL)；

3. 加入10mL乙腈，剧烈振摇；

4. 加入4g无水MgSO4和1g的NaCl；

5. 马上涡旋混合，以防止MgSO4共聚物的生成；

6. 振摇30s后，4300r/min离心5min；

7. 取出1mL初提液，转移至含有150mg无水MgSO4的离心管中；

8. 混合，5200r/min 离心1min；

9. 取出500µL上清液，用水稀释到1mL，得到提取液浓度约为0.5g/mL。

基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3] ：

1. 在5g或10g样品中，加入水到10mL；

2. 加20mL甲醇，使用 UltraTurrax 组织匀浆机匀浆2min；

3. 有时需要过滤或离心；

4. 加入NaCl溶液 (100mL水中含20g NaCl)，每6mL加入NaCl溶液2mL；

5. 用5mL样品溶液浸泡ChemElut柱；

6. 5min后，用16mL二氯甲烷洗脱；

7. 40℃挥发至干；

8. 用甲醇与水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL，水1mL) 重新溶解；

9. 用0.45µm滤膜过滤。

基于Lehotay et al. [4] 提出的方法：

1. 使用Molinex 混合器或类似设备匀质水果或蔬菜样品；

2. 加入乙腈，(15.0 ± 0.05)g 匀质的样品加乙腈15mL，超声波提取2min后，混旋5min；

3. 加入6g 无水MgSO4和1.5g NaCl的混合物，剧烈振摇1min；

4. 3000r/min 离心5min；

5. 取5mL上层溶液，加入1.8g 无水MgSO4和0.3g Bondesil C8 吸附剂；

6. 振摇20s；

7. 使用Eppendorf 5301型浓缩仪，或类似设备挥发至干；

8. 用乙腈/水＝1/9的溶液1mL重新溶解样品；

9. 12000r/min高速离心2min；

10. 上清液转入自动进样器的进样瓶中备用。

样品制备(粮食) [5]

1.称取10 g试样(精确至0.01 g)与10 g硅藻土混合，移入加速溶剂萃取仪的34mL萃取池中，在10.34MPa 压力、80℃条件下，加热5min，静态萃取3min，循环两次，然后用池体积60%的乙睛(20.4mL)冲洗萃取 池，并用氮气吹扫100 s。萃取完毕后，将萃取液混匀，对含油量较小的样品取萃取液体积的1/2(相当于5 g 试样量)，对含油量较大的样品取萃取液体积的1/4(相当于2.5g试样量)，待净化。

2.对A,B,C,D组农药:将Envi-18柱放入固定架上，加样前先用10mL乙睛预洗柱，下接梨形瓶，移入上述 萃取液，并用15mL乙睛洗脱，在旋转蒸发器上将洗脱液浓缩至约1mL，备用。

3.对E组农药:将上述萃取液在旋转蒸发器上浓缩至约1mL，将Sep-Pak Alumina N柱放入下接梨形瓶 的固定架上，加样前先用20 mL乙睛预洗柱，将样品浓缩液转移至净化柱上，再用3×10mL乙睛洗涤样液 瓶，并将洗涤液移入柱中，将洗脱液在旋转蒸发器上浓缩至约1mL，备用。

4.在Envi-Carb柱中加入约2 cm高无水硫酸钠，将该柱连接在Sep-Pak氨基柱顶部，并将串联柱放入下 接梨形瓶的固定架上。加样前先用4mL乙睛+甲苯( 3+1 )预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样 品浓缩液转移至净化柱上，再用3×2mL乙睛+甲苯(3+1)洗涤样液瓶，并将洗涤液移入柱中。在串联柱上 加上50 mL贮液器，用25 mL乙睛+甲苯(3+1)洗脱农药，收集于梨形瓶中，并在40 ℃水浴中旋转浓缩至 约0.5 mL。对A,B,C,D组农药，加入2×5mL正己烷进行溶剂交换两次，后使样液体积约为1mL，将浓缩 液置于氮气吹干仪上吹干，并迅速用乙睛+水(3+2)定容1mL，混匀，用于液相色谱—串联质谱测定。

色谱分离条件 Agilent 1100 系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。 色谱柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50mm×2mm，粒径 4µm。流动相：A相—水 + 5mM 甲酸铵；B相—甲醇 + 5mM 甲酸铵。

MS/MS检测：API 3200™或3200 QTRAP® LC-MS/MS液质分析系统；TurboIonSpray ® 离子源，负离子模式，MRM扫描 方式。