色谱柱在分析中的经验

Q1:色谱柱是否可以反冲，那什么柱子可以反冲，什么不可以?反冲后是正着用，还是反着用?

这是一个困扰很多液相使用者的问题。
很多人说，如果色谱柱柱头堵了，压力升高了，反冲完了效果很好！
也有很多人，包括厂商的工程师说不建议反冲，冲了会影响柱效。
多种说法众说纷纭，让这个问题几乎成了一个业界之谜。
那么，今天我们就来分析讨论一下，色谱柱到底能不能反冲，以及背后的原因是什么？
我们都知道，大多数液相色谱柱里面充满了直径几个微米的硅胶小球，这些硅胶小球在高压条件下被填入了色谱柱以后，色谱柱的两端需要用筛板封起来，这样既能够让流动相顺利通过，又保硅胶小球老老实实呆在色谱柱里面，不会跟着流动相跑出来。
当然筛板的孔径要够小，不然就封不住硅胶小球。
但是入口筛板孔径如果做得特小，也会产生一个问题，那就是很容易被样品堵塞。样品稍微有一点没处理好，或者没有溶解好，筛板就被堵了，柱压就升高了，至柱子就废掉了。
所以，很多厂商就决定把色谱柱入口的筛板孔径做得比出口筛板的孔径大一些，这样既能保硅胶小球不会被冲出色谱柱，也能让柱头不那么容易堵塞。
但是，这种情况下，色谱柱往往就不能反冲了。
因为如果反冲，在把堵塞在入口筛板上的污染物冲出来的同时，柱头的填料可能也会被冲出来，造成柱效的降，至色谱柱的报废。
说到这里，我们总结一下：
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如果色谱柱出入口筛板孔径一样的话，那就可以反冲，正反使用都无所谓，即使是色谱柱上面标注了方向（还需注意色谱柱的填料基质）。
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但是如果色谱柱出入口筛板孔径不一样的话（一般是入口孔径大于出口孔径），反冲就有可能造成填料漏出，柱效降等等。


Q2:如果柱子取下来放置一段时间，需要做什么保护吗?

对一般的反相柱，也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵头塞紧柱两头，以免保存溶剂挥发，应该不需要做殊的保护。

Q3:多个样品不好不离的时候，请问该怎么通过选择合适的柱子来提分离度?

提分离度可从三个主要影响因素来考虑，柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和增加柱长提柱效;选择性和固定相选择以及pH 条件有关，通过选择合适的色谱柱和合适的pH，可以提选择性;有时候适当延出峰时间增加保留因子，也可提分离度。

Q4:因为不知道流动相已走完，液相色谱柱空走了大概一晚上，请问这种情况下柱子还能用吗?如果可以应该如何再生?

还能用的。可能柱子里会有气泡进去，但之后多用流动相冲冲，看到基线稳定，就没问题了。用色谱柱的保存液低流速长时间冲洗，然后再检测一下柱效，看柱子是否恢复，液相建议设置一下压限，这样就不怕流动相光而会色谱柱。