分析四环素类药物的实验方法

样品制备（蜂蜜）基于GB/T 18932.23-2003方法[1]：

1．称取6 g试样(到0.01 g)置于150mL三角瓶中，加入30mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液于液体混匀器上快速混合1min，使试样*溶解。样液倒入50mL离心管中，以3000r/min离心5min，待净化。

2．将上清液移至下接Oasis HLB柱的贮液器中，以小于3mL/min通过Oasis固相萃取柱后，用5mL甲醇+水洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa的负压下抽干20min，后用15mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于100mL圆底烧瓶中。

3．按上述方法使洗脱液在减压情况下以小于3mL/min的流速通过阴离子交换柱,待洗脱液全部流出后，用5mL甲醇洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa负压下抽干5min,再用4mL流动相洗脱，收集洗脱液于5mL样品管中，定容至4mL，供测定。

四环素类药物

四环素类(TCs)为广谱抗菌药，主要有以下四种：

样品制备(肉类)

称取5.0 g肌肉组织均质样品，置于50mL离心管中，加入0.75%高氯酸溶液10mL，均质30 s，振荡提取3min，以4000 r/min离心10min，取上清液于试管中，再重复提取一次，合并上清液于试管中。加正己烷1mL，振荡1min，离心，除去正己烷层。水相过ODS-C18 柱（预先用5mL甲醇、2mL EDTA-Na2溶液和5mL去离子水洗过）净化，用10mL蒸馏水洗杂质，氮气吹干柱，以1mL含4%甲酸的甲醇溶液以1mL/min洗脱，洗脱液用于测定。

注意事项：

1、标准品用甲醇溶解配置储备液，使用前用流动相稀释到浓度为1µg/mL左右。

2、因四环素和强力霉素为同分异构体，[M+H]

+均为 m/z 445，需要分别优化条件，而且优化源参数

时，也应分别进样，确定各自的保留时间，并要求基线分离，另外2种不必基线分离。

3、梯度洗脱后进下一针样品时一定要充分平衡。

4、用空白提取液配制同样浓度标样，按相同方法进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，峰高有

色谱分离条件

Agilent 1100系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。

水相：5mmol/L 甲酸水溶液；有机相：乙腈。水相/有机相＝2/8，等度洗脱。或流动相：乙睛+甲醇

+0.4 %甲酸溶液(18+4+78)。流速：200µL/min。

色谱柱：C18，3µm，150mm×2.0mm。

柱温箱温度：25℃；进样体积：20µL。

参考文献：

1Tetracycline Residues in Honey (HPLC-MSD Method) ACC-042-V1.1,Canada.

2Official Method of Analy sis of AOAC International 17th Edition (2000) Appendix D, Appendix E.

3 蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法液相色谱—串联质谱法GB/T18932.23—2003.