等度洗脱和梯度洗脱的优缺点

等度洗脱和梯度洗脱的优缺点

在液相色谱分离条件中，重要的参数就是洗脱条件，其中分离条件又分为等度洗脱和梯度洗脱。
梯度洗脱:在同一个分析周期中，按程序不断改变流动相的浓度配比
等度洗脱则是指从头到尾只是用同一个流动相。
用不用梯度洗脱，主要看杂质的情况。同一物质有梯度和等度两种条件时，选梯度较高。杂质与杂质、主峰、溶剂峰的分离度要好(不好的话就要用梯度)。
(1)杂质和主成分极性相差很大，杂质要全能洗脱出来(有时等度情况下从两三个小时杂质也冲出不来，就须考虑等度)。
(2)杂质和主成分极性相差较大，杂质出峰太晚(等度冲两个小时出来个杂质，就可以通过梯度缩短检样时间)
(3)还有就是杂质极性比主峰的大，等度时要想主峰时间适杂质全堆在前边，杂质分开主峰又出峰太晚，这种情况也得考虑梯度洗脱。
在色谱分析时，等度洗脱和梯度洗脱各有优点和劣势。
等度洗脱
优点
对于等度洗脱而言，由于方法运行时，流动相的比例不发生变化，所以它对仪器的要求不高，需要一个单元泵就可以运行方法。
其次，由于等度洗脱条件单一，所以比较容易用来摸索方法设置，例如改变流动相比例，改变柱温等条件。
并且由于等度洗脱每次运行时的流动相比例相同，所以相同方法运行多个样品时，样品之间不需要设置平衡时间来让系统恢复到所需的流动相比例。
缺点
但是它也有缺点，那就是越往后出峰的组分色谱峰越宽。
并且大多数等度洗脱的方法分析时间较长。

梯度洗脱
又称为梯度淋洗或程序洗脱。
在气相色谱中，为了改对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，一般采用程序升温的方法。而在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。

优点
而梯度洗脱能够规避掉等度洗脱的问题，峰型得到改，很少拖尾。例如梯度洗脱的样品峰，无论先出峰还是后出峰的组分，它们的峰形基本能保尖锐对称。
其次由于梯度洗脱通常设置的流动相比例是让洗脱强度越来越强，这样能保在较短的时间内，让样品中强保留组分也能被洗脱出来。
缺点
但是伴随着这些优点也会有对应的缺点，先它对仪器的配置要求较高，通常需要配置四元泵或者二元泵。
其次它在每次运行样品之间，需要设置的平衡时间，来让系统中流动相的比例到达初始流动相比例。
之后，由于它的方法设置复杂，例如影响分离的有初始流动相比例、流动相的梯度变化、结束流动相比例、柱温箱温度等，所以方法的开发和优化会较为复杂。而且有时引起基线漂移。

大家可以根据自身情况判断应该选用什么方法