分析苯并咪唑药物的实验方法

MS/MS 检测 API 4000™ LC-MS/MS液质联用系统，Turbo V™离子源，正离子 / 负离子模式，MRM扫描方式。 

样品制备（肉产品）[1]

1．试样代表性部位，以捣碎机进行充分匀化。匀化后的试样在分析前一直冷冻保存。

2．称取（2.5±0.05) g均匀试样置于离心管底部。分别制备四份空白组织试样及一份对照试样、三份 添加标准的试样。在对照试样中加入100 µL纯DMSO。在组织试样中加入50 µL DMSO。在空白组织试样 和组织试样中分别加入50 µL 10 µg/mL工作溶液。然后在已加入50 µL 10 µg/mL工作溶液的三个空白组织试 样中分别加入50 µL 20、10、5 µg/mL工作溶液。

3．制备的每一试样中加入2.5 mL 6 mol/L HCl，盖好，将试样管放到（110±4) ℃的烘箱内。

4．1 h后把试样从烘箱中取出，将试样管放于干冰或冰上约5 min，冷却至室温。

5．向每个试样中加入2.0 mL水，以涡式混匀器混匀试样，用pH计监测pH值。慢慢加入足量(约1.23 g) 的碳酸钠，加入时间需4～5 min，调节pH至8～9.5。

6．向每个试样内加入15 mL乙酸乙酯，盖上塞子，平放于试管架上，振摇5 min。然后取下塞子，于 4000 r/min将试样离心5 min。

7．用吸移管将乙酸乙酯提取液转入另一50 mL玻璃离心管内，应尽量转移*。

8．重复操作步骤6和7，再次提取每个试样，把相应的提取液合并于各自的50 mL离心管内。

9．向每个合并的乙酸乙酯提取液中加入4.0 mL 1 mol/L HCl，盖上塞子，平放于试管架上振摇5 min。取 下塞子于4000 r/min离心5 min。

10．尽量*吸去乙酸乙酯相。在（35±5) ℃水浴上蒸去水溶液上残留的乙酸乙酯。

11．用涡式混匀器将试样混匀，同时慢慢加入足量(约0.33 g)碳酸钠，加入时间需1～2 min。用pH计 监测pH值，每个试样的pH值应为8～9.5。

12．每个试样中加入20 mL甲苯，盖上塞子平放于试管架上振摇5 min，取下塞子于4000 r/min离 心5 min。

13．尽量*吸去甲苯相。在（35±5) ℃的水浴上蒸去水相上残留的甲苯。

14．对于每一个试样，相对应将一10 mL玻璃注射器用夹子固定在环形架上。注射器的路氏接头前端 连接SEP-PAK C18柱体。

15．将每支柱用2 mL甲醇预洗，而后用2 mL 0.2 M磷酸钾缓冲溶液(pH 8.0)洗涤。加入每种试剂后， 经过安装于注射器顶部的橡皮塞缓缓通入氮气，当氮气开始出柱时即停气。氮气流速1～2 mL/min。弃去 洗脱液。

16．从步骤13中得到的每一试样水相转入预先洗涤好的各注射器柱系统内。用步骤14的方法，应用 氮气使溶液流经柱体洗提，然后各取每一试样管水洗液1 mL(经涡式混匀器混匀)，使用巴氏吸移管采用类 似方法将水洗液分别转入各注射器柱系统内,弃去洗脱液。

17．再取每个试样管水洗液1 mL(经涡式混匀器混匀)，分别转入各注射器柱系统内，按步骤15的方 法应用氮气使此水洗液流经柱体洗提,弃去洗脱液。

18．向每一注射器柱系统内分别加入2 mL甲苯，按步骤15的方法用氮气使甲苯流经柱体洗提，弃去 洗脱液。

19．在每一注射器柱系统下面分别放置一15 mL离心管，向每个柱系统内加入2 mL乙酸乙酯，按步骤 15的方法用氮气使乙酸乙酯流经柱体进行洗脱。在这部分洗脱液中含有待测化合物。

20．向步骤19中得到的每份洗脱液中分别加入约0.5 mL甲醇，混匀，得到均匀的溶液。

21．至干后加入0.5 mL水 — 甲醇溶液(70＋30)，混匀，重新溶解残渣。

22．30 min后将每个重新溶解的试样加入微量过滤装置内，采用0.2 µm滤膜过滤。然后将每个过滤器 及试样提取液于4000 r/min离心5～10 min。

23．将滤液转入15 mL具塞玻璃离心管内，用水 — 甲醇(70＋30)调节每一滤液体积为0.5 mL。混匀后 移取0.1 mL供分析。

色谱分离条件 Agilent 1100 系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。 色谱柱：Inertsil ODS-3 150 mm×2.1 mm。 流速：200 µL/min。 流动相：水 / 甲醇 + 5 mM 甲酸铵（pH=4.0）。 柱温箱温度：25 ℃；进样体积：20 µL。MS/MS 检测 API 4000™ LC-MS/MS液质联用系统