分析瘦肉精等肾上腺素β-兴奋的实验方法
β肾上腺素兴奋ji,主要用于防治人、畜支气管哮喘和支气管痉挛,治疗剂量较低。在饲料中添 加β肾上腺素兴奋ji如盐酸ke伦特罗(瘦肉精)等具有营养再分配作用,提高饲料报酬,提高瘦肉率的 效果。盐酸ke伦特罗在肌肉特别是在内脏中会有高浓度的残留,对人与动物的肝,肾及神经系统产生危 害。欧盟早颁布法规93/257/EWG ( 98/536/EG修订)禁止其作为饲料添加剂使用,美国和加拿大也禁用, 我国农业部亦发文作出同样规定。
样品制备(肝、肉) 1.称取5 g肝、肌肉或0.2 g视网膜匀质; 2.水解:蛋白酶水解肌肉;β-葡萄糖醛酸糖苷酶或硫酸酯酶水解肝或视网膜; 3.Extrelut 柱LLE,乙酸乙酯 / t-丁醇(90 / 10)洗脱; 4.用酸性氧化铝SPE,乙酸乙酯和甲醇洗脱; 5.Screen Dau SPE,乙酸和甲醇淋洗,乙酸乙酯 / NH3 (97 / 3)洗脱。
色谱分离条件 Agilent 1100 系统: G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。 色谱柱: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 50 mm×4.6 mm(1000 µL/min,2000 µL/min)。 流动相: A相—水 + 5 mM 甲酸铵(pH=4.0); B相—水 / 乙腈 (5 / 95) 。 梯度设置:
MS/MS 检测 API 4000™ LC-MS/MS液质联用系统,Turbo V™ 离子源(无分流),正离子模式,MRM扫描方式。
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