AB液质联用仪分析孔雀石绿与相关的三苯甲烷类染料的实验方法

化学试剂 MG (孔雀石绿)     LMG (隐色孔雀石绿) C23H25N2    CAS: 2437-29-8    C23H26N2    CAS: 129-73-7     BG (亮绿)      CV (结晶紫) C27H33N2 CAS: 633-03-4    C25H30N3     CAS: 548-62-9   建议的内标：D5-LMG。

AB液质联用仪色谱分离流动相的制备： 1 M乙酸铵溶液：溶解77 g甲酸铵于1 L HPLC级的水中。 流动相A：在1 L HPLC级的水中，加入1 mL甲酸，10 mL 1 M乙酸铵溶液。 流动相B：在100 mL水中，加入1 mL甲酸，10 mL乙酸铵溶液，混匀后，用HPLC级的乙腈稀释到1 L。

样品制备（鱼、水产品） 基于Bergwerff等人提出的方法[1]： 1．将2 mL pH=3.0的Mcllvaine溶液、100 mL 1 M的p-TSA、50 mL的N,N,N,,N,-四甲基-1,4-苯乙烯二胺的甲 醇溶液(1 mg/mL)进行混合； 2．加入2 g匀浆的样品于50 mL螺丝加盖的聚丙烯管中； 3．涡旋混合； 4．加入12 mL乙腈； 5．振摇15 min； 6．15 ℃下，3400 r/min离心5 min； 7．加入pH=6.0的Mcllvaine溶液； 8．加入12 mL乙腈； 9．振摇15 min； 10．15 ℃下，3400 r/min离心5 min； 11．合并上清液；12．加入6 mL 二氯甲烷； 13．15 ℃下，3400 r/min离心5 min； 14．有机相进行固相萃取。

基于Effkemann等人提出的方法[2]： 1．称量2 g匀浆过的鱼肉组织； 2．加入100 µL内标溶液(D5-LMG，1 µg/mL)； 3．加入900 µL水； 4．加入2 mL盐酸羟胺溶液(5 g/L)； 5．振摇并放置10 min； 6．加入8 mL乙腈； 7．振摇10 min； 8．4 ℃下，3000 r/min离心5 min； 9．将上清液吸入样品，备用。 注意：新鲜的鱼肉提取后，应在几个小时内完成分析，以防止孔雀石绿、隐色孔雀石绿的降解。

色谱分离条件 Agilent 1100 系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。 AB液质联用仪色谱柱：Phenomenex Synergi Max-RP反相柱，50 mm×2 mm，4 µｍ，80 Å。 流动相：A相—水 + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸铵；B相—水 / 乙腈(10 / 90) + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸铵。 梯度设置：