AB液质联用仪分析氯霉素的实验方法

化学试剂

氯霉素Chloramphenicol C11H12Cl2N2O5 CAS: 56-75-7

建议的内标：D5-氯霉素。

色谱分离流动相的制备：

1M 乙酸铵溶液：溶解 77g 乙酸铵于1L HPLC级的水中；

流动相A：在1L HPLC级的水中，加入1mL甲酸、5mL 1M 乙酸铵溶液；

流动相B：1L HPLC级的甲醇中，加入1mL甲酸、5mL 1M 乙酸铵溶液。

样品制备(牛奶样品)

基于Hormazabal等人提出的方法[1]：

1．量取2mL牛奶样品；

2．加入100µL 内标溶(D5-氯霉素，1µg/mL)；

3．加入5mL乙腈提取；

4．4000r/min，离心10min；

5．用5mL氯fang清洗上清液；

6．4000r/min，离心10min；

7．弃去上层水相；

8．N2流保护下干燥下层；

9．将残留物溶解于100µL 甲醇中；

10．加入3mL水、0.5mL 0.5mol/L的磷酸氢二钠(pH=6.0)；

11．将溶液加入准备好的Bond Elute LMS固相提取柱；

12．分别用2mL水和0.3mL的水/甲醇冲洗；

13．用0.3mL甲醇进行洗脱，洗脱2次；

14．N2流保护下，55℃温和加热至干；

15．残留物溶解于1mL的水中；

16．用0.45µm的滤膜进行过滤，备用。

样品制备(奶粉样品) 基于Hormazabal等人提出的方法[1]： 1．称量5g奶粉； 2．加入100µL内标溶(D5-氯霉素，1µg/mL)； 3．加入25mL水进行稀释； 4．Ultra Turrax 匀浆 1min； 5．继续使用上面牛奶处理方法(第3～16步)。

样品制备(蜂蜜样品1)

基于Nieland 等人提出的方法[2]：

1．溶解5g蜂蜜于20mL水中；

2．加入100µL 内标溶 (D5-氯霉素,1µg/mL)；

3．混旋均匀；

4．20mL乙酸乙酯，超声提取5min；

5．4000r/min，离心10min；

6．将上清液移入玻璃试管；

7．N2流保护下55℃温和加热至干；

8．用1mL水溶解残留物；

9．用0.45µm的滤膜进行过滤，备用。

样品制备(蜂蜜样品2)

1．溶解10g蜂蜜于15mL水中；

2.．加入100µL内标溶 (D5-氯霉素,1µg/mL)；

3．加入Extrelut NT柱(柱容量20mL)；

4．静置45min；

5．用40mL环己烷/乙酸乙酯(95/5)清洗2次；

6．用40mL环己烷/乙酸乙酯(50/50)洗脱2次，合并洗脱液；

7．用NaSO4干燥、过滤；

8．N2流保护下，55℃温和加热至干；

9．用1mL水溶解残留物；

10．用0.45µm的滤膜进行过滤，备用。

样品制备(果冻样品)

1．称量2g果冻；

2．加入100µL内标溶 (D5-氯霉素，1µg/mL)；

3．加入20g硅酸镁载体(活化60～100Å孔径)；

4．用玻璃棒匀浆；

5．准备一根5g硅酸镁的玻璃柱；

6．将匀浆混合物上到玻璃柱上；

7．用250mL乙酸乙酯/环己烷(50/50)冲洗试管、玻棒、柱子；

8．N2流保护下55℃温和加热至干；

9．用1mL水溶解残留物；

10．用0.45µm的滤膜进行过滤，备用。

样品制备(鱼、水产品)

基于Effkemann等人提出的方法[3]：

1．称量5g鱼或其他水产品的组织并匀浆；

2．加入100µL 内标溶 (D5-氯霉素，1µg/mL)；

3．加入10mL乙酸乙酯；

4．用Ultra Turrax匀浆1min；

5．3000r/min，离心10min；

6．将上清液移入玻璃试管；

7．N2流保护下，55℃温和加热至干；

8．用1mL水溶解残留物；

9．加入1mL环己烷，混匀；

10．3000r/min，离心10min；

11．转移下层水相到样品管中，备用。

色谱分离条件

Agilent 1100 系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。

色谱柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50mm×2mm，4µm，80Å。

流动相：A相—水+0.1%甲酸+5mM乙酸铵；B相—甲醇+0.1%甲酸+5mM乙酸铵。

梯度设置：

AB液质联用仪MS/MS 检测