采用三重四极杆质谱仪对血浆中的候选药物混合物进行灵敏、耐用的定量分析

目的：为检测和定量人血浆中目标制剂混合物开发一种灵敏、耐用和可重现的 LC-MS/MS 分析 方法。

前言：在大多数制药企业中，小分子候选药物作为新化学实体或仿制药，占据了药物发现管道 的大部分比例。目标定量分析是工作流程的一个关键组成部分，其要求成功开发出 小分子药物。而这些目标定量分析必须在生物基质中完成，因此，常常带来分析挑战。 在本项研究中，我们报道了为大鼠血浆中多个药物标准品开发的灵敏、耐用、可靠和可 重现的 LC-MS/MS 分析方法。

实验：样品制备 采用乙腈（ACN): 血浆 =3:1 破坏血浆，从而制备已破坏的血浆 储备液。将制备的溶液在 10,000 rpm 下离心 10 分钟。去除上 清液，并加入等体积的水，终得到已破坏血浆的储备原液。 将已破坏血浆储备混合液中每种标准化合物浓度为 1 mg/mL 的 储备液稀释至 1 pg/mL–25,000 pg/mL 和 10 pg/mL-100,000 pg/mL。将同位 素标记的内标化合物加入到每个校正水平上，从而得到终浓 度为 0.5ng/mL 的内标溶液。所有试剂均购自 Cerilliant 公司（朗 德罗克，得克萨斯州），浓度为 1 mg/mL 的甲醇溶液。

液相色谱法：采用 赛默飞 VanquishTM Horizon HPLC 系统 进行色谱分离。所使用的色谱柱为 Thermo ScientificTM Hypersil GOLDTM aQ C18 极性封端 LC 色谱柱（100 × 2.1 mm，1.9 µm 粒径）。流动相 A 和 B 分别为 10 mM 甲 酸铵水溶液（采用 Fisher ChemicalTM OptimaTM 级纯水） 和 0.1% 甲酸乙腈溶液。柱温为 50 ℃。总运行时间为 3.5 分钟（表 1）。

质谱分析法 采用赛默飞 TSQ AltisTM三重四极杆质谱仪进行质谱分析，配置 Thermo ScientificTM OptaMaxTM NG 离子源室。 表 2 和表 3 显示了实验设置中使用的质谱仪离子源和 SRM 参 数。

数据分析：采用 Thermo ScientificTM TraceFinderTM 软件采集并处理数据。

结果与讨论：研究发现，采用 TSQ Altis MS 测得的每个候选药物的定量下限 （LLOQ）明显低于采用以前几代 MS 系统的测量值（表 4）。 此外，内标化合物的 %CV 值显著降低也意味着 TSQ Altis 质谱 的耐用性和重现性更优。300 pg/mL QC 2 的典型色谱图见图 1。 QC 线性和重现性的更多详细信息见表 5。

结论：本应用文档中涉及的分析方法在整个分析的动态范围内呈现出 优异的线性和重现性。该方法表明，TSQ Altis 质谱提供了药物 化合物分析中所需的灵敏度和重现性。

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