采用TSQ Quantis分析尿液中的乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯

目的：采用液相色谱与三重四极杆质谱联用技术，为尿液中 EtG 和 EtS 的法医毒物学分析开发耐用灵敏的 LC-MS/MS 分析工作流程。

前言：*，乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS）可作为监测乙醇消耗量的生物标志物。虽然它们是乙醇的次生代谢产物，但由于半衰期较长，因此可在法医研究中被用于检测过去是否服用过酒精。

实验：
样品制备：将等体积（50 µL）尿液与内标化合物（5000 ng/mL EtG-d5 和 500 ng/mL
EtS-d5）混合，然后用 900 µL 的水稀释 20 倍。将 5 µL 样品进样至 LC-
MS/MS 系统。

液相色谱方法
采用 Thermo Scientific TM VanquishTM Flex HPLC 系统和Phenomenex ® Synergi TM Hydro 反相色谱柱（100×3 mm，2.5 µm 粒径）进行色谱分离。流动相 A 和 B 分别为含0.1％ 甲酸的水和含 0.1％ 甲酸的甲醇溶液，溶剂分别为Fisher Chemical TM Optima TM 级水和甲醇。总运行时间为6 分钟。

质谱方法
采用配置加热电喷雾电离探针的 TSQ Quantis 三重四极杆质谱进行分析。表 1 显示了质谱仪的离子源参数

分析 EtG、EtS 及其氘化内标化合物时同时监测了两种选择反应监测（SRM）离子对，用于离子比率确认（IRC）。在分时选择反应监测（t-SRM）模式下进行扫描，循环时间为 0.4 秒。表 2 显示了本次分析中使用的 SRM 离子对信息。

数据分析：采用 Thermo Scientific TM TraceFinder  TM 软件采集并处理数据。

评价
通过分析校正曲线，然后同一样品重复进样六次作为质控样（QC），测定分析精密度和准确度。通过 17 个不同批次人尿液中的内标信号评价基质效应。

结果与讨论
将 EtG 和 EtS 的定量限（LOQ）定义为根据线性校正曲线反算得到的校正物浓度位于理论值 20％ 范围内、离子比率在目标物 20% 范围内且重复进样的 %RSD 低于20% 时的低浓度。正常尿液中 EtG 和 EtS 的 LOQ 分别为 100 ng/mL 和 10 ng/mL。图 1 显示了各分析物在LOQ 下的提取离子流图。图 2 显示了两种化合物的校正曲线。

重复进样校正浓度范围内的质控样品时，该方法呈现出*的精密度。EtG 的 %RSD 小于 9.8％，EtS 的 %RSD小于 4.0％。此外，17 个不同批次的正常受试尿液中未观察到明显的基质效应。图 3 显示了与校正样品相比，不同批次尿液的内标峰面积回收率。

结论：

• TSQ Quantis 三重四极杆质谱仪为尿液中 EtG 和 EtS的分析提供了的灵敏度和耐用性。
• 采用该方法分析尿液中的 EtG 和 EtS 时，定量限分别为 100 ng/mL 和 10 ng/mL。
• 该方法适用于法医毒物学分析

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