乳制品中三聚氰胺的LC- MS分析测定

三聚氰胺（Melamine）简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量为66.6％，折合成粗蛋白含量为416.27%，加入宠物饲料和牛奶中可以大幅提高蛋白质测定表观含量，但食用后可诱发肾衰竭并导致死亡，因此一直禁止在饲料和食品中使用。2007年，国内外发生多起宠物因食用添加了三聚氰胺的宠物食品而致死的例子，大量相关产品被召回。2008年9月，国内发生奶粉中三聚氰胺导致婴幼儿肾结石和肾功能衰竭甚至死亡的恶性事件。
　　本文建立对乳制品中三聚氰胺的单四级杆液质分析测定方法，以电喷雾离子化方式正离子模式监测，化合物的[M+H]+作为定量分析用的选择性检测离子,解决有时在液相分析时色谱分离不*及定性信息不充分的问题, 从而避免液相色谱紫外测定时样品假阳性情况。

1. 实验及方法
1.1 装置概要
　　本实验使用Shimadzu LCMS-2010EV液相质谱仪，C-20AD输液泵，SIL-20AC自动进样器，CTO-20AC柱温箱,含LC-20AD输液泵，SIL-20AC自动进样器，CTO-20AC柱温箱，DGU-20A3在线脱气机, LCMSsolution 3.20工作站软件。

1.2 试剂
　　甲醇：　色谱纯
　　乙腈：　色谱纯
　　氨水：　浓度25%-28%
　　　　　　饱和乙酸铅溶液
　　缓冲液：配制含10mM柠檬酸和10mM辛烷磺酸钠的缓冲液，调节pH值到3.0
　　氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中

1.3 样品前处理
　　固体样品取样2g，液体样品取样5g，准确加入9mL缓冲液溶液，加入1mL乙酸铅溶液。摇匀，剧烈震荡25min，10000r/min离心5min，取上清液。分别用3mL甲醇，3mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱，加入2mL（液体样品3mL）上清液上柱。依次用0.1mol/L盐酸水溶液3mL水和甲醇3mL洗柱，抽近干后用氨水甲醇溶液3mL洗脱。洗脱液50℃氮气吹干，残渣用70％乙腈溶解，0.45um滤膜过滤，上机测定。

1.4 分析条件
　　色谱柱：CAPCELL PAK CR（1:4） 4.6×150mm ,5μm；
　　流动相：乙睛/10mM NH4Ac (50:50)，
　　　　　    冰醋酸调节混合液至pH=3；
　　流速：    1.5mL/min (约0.3mL/min进质谱)；
　　柱温：    30℃；
　　进样量：10μL；
　　质谱参数：电喷雾离子化ESI(＋)，
　　　　　　    雾化气: 1.5L/min，
　　　　　　    干燥气: 0.1MPa，
　　　　　　    CDL 温度：250℃，
　　　　　　    加热块温度：200℃，
　　　　　　    检测器电压: 1.6 kV。

2. 实验结果
2.1 扫描方式结果见图1及图2

图1　 TIC (+)


图2 　SCAN (+) [M+H]+ m/z 127

2.2 标准曲线
　　三聚氰胺标准储备液：称取50mg（到0.1mg）的三聚氰胺标准品，用70%乙腈溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，该溶液浓度为0.5mg/mL。
　　稀释标准储备溶液分别得到0.1μg/mL, 0.5μg/mL, 1μg/mL, 5μg/mL, 10μg/mL,50μg/mL分别进样，得到校准曲线如图3所示。质谱分析中选择性离子监测方式(SIM), m/z 127

图3 标准曲线

　　标准曲线方程Y = 410,165.3X + 261,083.0 (Y- 峰面积) 相关系数为0.9996，线性关系良好, 检出限为50ppb

2.3   标准品精密度数据
　　取浓度为1μg/mL三聚氰胺标样，连续进样5次，结果如表1所示。

　　表1 保留时间与峰面积的重现性

　由表1结果可见，本方法测定三聚氰胺具有良好的精密度和重现性。

2.4   样品谱图结果
　　实际样品谱图结果见下图

图4 空白液态奶



图5 空白液态奶加标准品

3. 结论
岛津单四级LCMS-2010EV分析乳制品三聚氰胺可以避免液相色谱紫外检测样品时假阳性结果, 并且其成本比使用串联质谱分析低, 可以很好的满足乳制品中三聚氰胺的分析测定要求。